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申请/专利权人：中国科学院深圳先进技术研究院
申请日：2023-06-01
公开（公告）日：2024-12-03
公开（公告）号：CN119061074A
专利技术分类：......杆状病毒载体[2006.01]
专利摘要：本发明涉及一种重组杆粒及其制备方法，将异源功能性基因表达元件连接至供体质粒上之后，将第一温度敏感复制子控制元件连接至供体质粒，获得第一穿梭质粒；在将第一穿梭质粒转化至DH10Bac细菌前，将第二温度敏感复制子控制元件连接在辅助质粒上；从而使穿梭质粒和辅助质粒的表达和复制可由温度控制，在完成Tn7转座酶介导的重组后，升高温度即可使第一穿梭质粒和辅助质粒在细菌里自行丢失，从而提高分离的重组杆粒的纯度，获得高纯度的重组杆粒。本方法技术难度低、简单易操作，并且获得的重组杆粒的纯度高，适合大规模、工程化地生产。
专利权项：1.一种重组杆粒的制备方法，包括以下步骤：S1、将异源功能性基因表达元件连接至供体质粒上，获得第一穿梭质粒；S2、将所述第一穿梭质粒转化至DH10Bac细菌中，获得重组杆粒混合物；所述DH10Bac细菌中含有第二穿梭质粒和辅助质粒；S3、从所述重组杆粒混合物中分离出所述重组杆粒；其特征在于，在所述步骤S1中，将所述异源功能性基因表达元件连接至所述供体质粒上之后，将第一温度敏感复制子控制元件连接至所述供体质粒，获得所述第一穿梭质粒；在所述步骤S2中，在将所述第一穿梭质粒转化至所述DH10Bac细菌前，将第二温度敏感复制子控制元件连接在所述辅助质粒上；所述步骤S1和所述步骤S2的温度在所述第一温度敏感复制子控制元件和所述第二温度敏感复制子控制元件的失活温度以下。
百度查询： 中国科学院深圳先进技术研究院 一种重组杆粒及其制备方法
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