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摘要：本发明属于生物安全技术领域，涉及一种利用二氯甲烷安全高效地提取土壤磷脂脂肪酸的方法。本发明利用二氯甲烷比同类氯代物稳定，毒性小的特点，通过使用二氯甲烷代替常规氯仿不仅大大提高了提取土壤磷脂脂肪酸（PLFA）的效率，而且对人体和环境更加健康、安全和友好。
主权项：1.一种利用二氯甲烷安全高效地提取土壤磷脂脂肪酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、在土壤中依次加入柠檬酸缓冲液、二氯甲烷、甲醇进行浸提得浸提液，S2、将浸提液离心分离，重复步骤S1对离心后的底层土样进行第二次浸提，然后依次加入正己烷、异丙醇、水进行第三次浸提，合并三次浸提的浸提液；S3、在浸提液中加入柠檬酸缓冲液和二氯甲烷进行遮光静置，静置分层后取下层二氯甲烷溶液加入甲醇进行振荡，然后氮气吹干，再经SPE萃取柱进行提取得磷脂液；S4、在磷脂液中加入甲醇甲苯混合液进行溶解，然后加入氢氧化钾甲醇溶液进行水浴加热，再加入正己烷二氯甲烷混合液，添加醋酸和去离子水进行振荡离心,转移上层有机相后加入加正己烷异丙醇混合液进行振荡离心，转移上层有机相，氮气吹干；二氯甲烷中含有5-10%（wv）的乙醇；步骤S3遮光静置时间为20-24h；步骤S3提取具体为：先用二氯甲烷洗SPE柱，将二氯甲烷溶液并转移到SPE柱中，再用二氯甲烷洗中性脂，加丙酮洗糖脂，加甲醇洗磷脂，加内标后氮气吹干；内标为浓度30-35ppm的十九烷酸甲酯溶液；步骤S4正己烷二氯甲烷混合液中正己烷和二氯甲烷体积比为2-5：1；步骤S1柠檬酸缓冲液、二氯甲烷、甲醇的体积比为1：1-1.5：2-3。
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