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龙图腾网恭喜中邦碳能(江苏)科技有限公司;中国科学院分子植物科学卓越创新中心申请的专利一种提升梭菌气体发酵性的方法及应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116144693B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-18发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202211721179.0，技术领域涉及：C12N15/74；该发明授权一种提升梭菌气体发酵性的方法及应用是由顾阳;姜卫红;张紫文;周堃;郁岚;刘金课设计研发完成，并于2022-12-30向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种提升梭菌气体发酵性的方法及应用在说明书摘要公布了：本发明涉及代谢工程菌的技术领域，尤其涉及一种提升梭菌气体发酵性的方法及应用，通过在质粒Ppta‑18450上过量表达CLJU_c18450，利用电穿孔转化将构建的质粒Ppta‑18450通过电穿孔转化的方法导入到永达尔梭菌标准株中。本发明通过以上设计，可可提高梭菌的CO2CO的利用能力以及产物合成能力。

本发明授权一种提升梭菌气体发酵性的方法及应用在权利要求书中公布了：1.一种提升梭菌气体发酵性的方法，其特征在于：所述的梭菌为永达尔梭菌（Clostridiumljungdahlii），源于德国国家培养物保藏中心DSMZ的永达尔梭菌标准株，保藏号为DSMNO.13528；S1：构建过量表达基因CLJU_c18450的质粒Ppta-18450，所采用的质粒骨架为pMTL83151，所使用的驱动基因表达的启动子为Ppta；具体操作过程如下：以上述永达尔梭菌标准株基因组为模板，使用PCR方法扩增基因CLJU_c18450，引物为18450-F和18450-R，同时使用引物Ppta-F和Ppta-R扩增启动子Ppta，随后，以PCR扩增的产物CLJU_c18450和Ppta同时作为模板，使用引物Ppta-F和18450-R，再次通过PCR扩增得到DNA片段Ppta-18450，接着，用Thermo快切酶XbaI和BamHI双酶切质粒骨架pMTL83151，上述扩增得到的DNA片段Ppta-18450与酶切的质粒骨架之间存在大于21bp同源序列，二者通过同源重组酶生成环状的Ppta-18450质粒，后者经转化进入大肠杆菌感受态细胞TOP10，并涂布于含有氯霉素的固体培养基上进行培养，24h长出的单菌落即为含有Ppta-18450质粒的大肠杆菌转化子，所用引物序列如下：18450-F：5’TAAATTTAAAGGGAGGAAATGAACatgaataaaactcaaaatacatttataacatcaag3’；18450-R：5’tggacgcgtgacgtcgactctagattattttttttcaaaactaccaccttttttaaaag3’；Ppta-F：5’cgaattcgagctcggtacccggggatccAGAAATTTTCCTTTCTAAAATATTTTATTCC3’；Ppta-R：5’GTTCATTTCCTCCCTTTAAATTTAAC3’；S2：永达尔梭菌电转感受态制作，将保藏在甘油中的永达尔梭菌接种到液体培养基中，进行活化培养，待种子液0D600达到0.8-1.0时，用接种环蘸取少量菌液，在固体培养基上划线，厌氧培养，挑取平板上长出的单菌落，将其接种到5mL液体培养基中，待其长至OD600为0.8-1.0时，以5%（vv）接种量将菌液转接到200mL液体培养基中扩大培养，后者长至0D600为0.4-0.5时，加入蔗糖溶液和甘氨酸溶液，处理2h将其置于冰上20min，并离心收集菌体，去除上清液，用事先预冷的缓冲液洗涤菌体2-3次，随后完全倒弃上清液，最后，用2-3mL缓冲液重悬菌体，并将其存放于-80℃备用；S3：永达尔梭菌电穿孔转化，构建的质粒Ppta-18450通过电穿孔转化的方法导入到永达尔梭菌标准株中，获得工程菌株。

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