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龙图腾网恭喜四川省食用菌研究所申请的专利一种灵芝外泌体及其制备方法和应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN116875526B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-04-22发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202311079193.X，技术领域涉及：C12N5/04；该发明授权一种灵芝外泌体及其制备方法和应用是由谢丽源;陈影;曹雪莲;唐杰;吴翔;许瀛引;彭卫红设计研发完成，并于2023-08-25向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种灵芝外泌体及其制备方法和应用在说明书摘要公布了：本发明属于生物领域，具体涉及一种灵芝外泌体及其制备方法和应用。本发明灵芝外泌体的制备方法包括如下步骤：A、将灵芝液体发酵培养得发酵液；B、发酵液经过多次过滤‑离心‑重悬‑离心，收集得到灵芝外泌体。本发明灵芝外泌体的制备方法实现了菌源性外泌体获取的途经，能够同时保证外泌体的含量、纯度、功效，本发明灵芝外泌体采用透镜电镜形态观察为圆形或者椭圆形的环状结构；采用粒子追踪分析仪分析粒径和浓度表明，平均粒径大小为71.25nm，浓度为3.04×109个mL。而且本发明制备方法效率高，操作简单，易大规模生产。

本发明授权一种灵芝外泌体及其制备方法和应用在权利要求书中公布了：1.灵芝外泌体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A、将灵芝液体发酵培养得发酵液；B、发酵液经过C1离心-C2浓缩-C3离心-C4过滤-C5离心-C6重悬-C7离心，最终得到灵芝外泌体，收集得到灵芝外泌体；其中：步骤A中所述液体发酵采用的液体发酵培养基为：葡萄糖15-25gL、马铃薯150-250gL、蛋白胨2-5gL、酵母粉0.5-2.5gL、KH2PO40.5-2gL、MgSO40.1-1.1gL、pH自然；步骤A中所述液体发酵培养的培养条件为：在所述液体发酵培养基中接种灵芝种子培养基，调节pH值为4-7.5、接种量8%~16%，转速100-180rmin、培养温度20-30℃，装液量60~180mL，培养5-11d，测定发酵液的蛋白质浓度；所述灵芝种子培养基是采用以下方法制备：A1、活化菌种块培养：灵芝活化菌种接入PDA培养基中培养，得到灵芝活化菌种块；A2、制备种子培养基：灵芝活化菌种块接入液体种子培养基，得到灵芝种子培养基；其中，步骤A1培养条件为将灭菌后的PDA培养基倒入一次性培养皿中制作成平板，放置在无菌状态下冷却，再将活化菌种接入平板中心培养，培养时间为温度20-30℃培养5-9d，得到灵芝活化菌种块；步骤A1活化菌种接种量与培养皿平板的接种比例为一块培养皿接种直径3mm-7mm的活化菌种；步骤A2所述液体种子培养基按照下述比例配制：马铃薯200g、葡萄糖15-25g、pH自然，蒸馏水1L；步骤A2中，灵芝种子培养基培养条件为：转速110-130rmin、培养温度20-30℃，加入玻璃珠，培养5d-11d；步骤B中所述C1离心：步骤A所得发酵液S1在0-8℃条件下4000×g转速离心，20min，收集上清液，得上清液S2；步骤B中所述C2浓缩：将步骤C1所得上清液S2浓缩至原体积的110-120，得到浓缩液S3；步骤B中所述C3离心：将浓缩液S3在0-8℃条件下10000×g转速离心，45min，收集上清液，得上清液S4；步骤B中所述C4过滤：将步骤C3所得上清液S4采用0.22-0.45μm微孔滤膜过滤，收集滤液S5；所述C5离心：将步骤C4所得滤液S5在0-8℃条件下140000×g转速离心，离心80min，去除上清液，收集沉淀；所述C6重悬：将步骤C5所得沉淀采用1×PBS溶液重悬得到混合液，所述沉淀与1×PBS溶液体积比为1:1-1:6，混合液采用0.22um微孔滤膜过滤，减少外泌体的聚集，收集滤液S6；所述C7离心：将步骤C6所得滤液S6在0-8℃条件下140000×g转速离心，离心80min，高速沉淀外泌体，去除上清液，收集沉淀即得灵芝的外泌体。

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