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快速检测转玉米PEPC基因作物的ELISA试剂盒及其应用 

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申请/专利权人:江苏省农业科学院

摘要:本发明公开了一种快速检测转玉米PEPC基因作物的ELISA试剂盒及其应用,属于农业科学技术领域。利用玉米PEPC蛋白的特异性单克隆抗体和多克隆抗体研制了快速检测玉米PEPC蛋白的试剂盒及检测方法,以该方法建立的玉米PEPC蛋白的ELISA试剂盒的形式提供,具有使用方便、操作简单、检测快速灵敏、结果准确可靠等特点。该试剂盒可在实验室条件下快速检测出玉米PEPC蛋白是否存在,可以应用于转玉米PEPC基因植物(如水稻,小麦,烟草等)中PEPC蛋白的定性分析;该试剂盒在-20℃下保存12个月后仍然有效。

主权项:一种用于快速检测玉米PEPC基因表达蛋白的ELISA试剂盒,包括:196孔酶标板:包被玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因PEPC蛋白多克隆抗体的酶标板,包被浓度1:1600‑1:3200;2玉米PEPC蛋白单克隆抗体:由保藏号是CCTCC2012199的鼠杂交瘤细胞4E5制备的单克隆抗体;3酶标二抗:辣根过氧化物酶HRP标记的羊抗鼠IgG,工作效价1:5000‑1:10000;4阴性对照品:未转玉米PEPC基因的水稻蛋白提取液;5样品处理液:pH7.5、50mmol·L‑1Tris‑HCL,1mmol·L‑1MgCl2,5mmol·L‑1二硫苏糖醇DTT,质量比2%聚乙烯吡咯烷酮PVP,质量比10%甘油;6稀释液为磷酸盐缓冲液PBS0.01M,pH7.5;7洗涤液为磷酸盐吐温缓冲液PBST:1000mL0.01MPBS中加0.5mLTween‑20;8底物溶液:底物缓冲液:Na2HPO4·12H2O0.2g;NaH2PO4·2H2O6.84g,双蒸水500mL;4℃保存备用;TMB母液:TMB40mg;DMSO5mL;避光4℃保存备用;双蒸水配制的体积比1%H2O2。

全文数据:

权利要求:

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