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申请/专利权人：山东世通检测评价技术服务有限公司

申请日：2017-09-19

公开（公告）日：2018-02-06

公开（公告）号：CN107664672A

专利技术分类：.反色谱法，即，被分析物在固定相中[2006.01]

专利摘要：本发明提供一种同步测定乳粉中L‑抗坏血酸、D‑抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法，其中提取液使用除氧的硫代硫酸钠和偏磷酸混合溶液，可以有效保护活性抗坏血酸，提高其稳定性，无需避光操作，实验操作简便，提取物在低温条件下24h内性质稳定。本发明所涉及的色谱条件对色谱柱损伤较小，可延长色谱柱寿命；流动相由磷酸二氢钾和癸胺构成，其浓度可以提高分离度，抗坏血酸浓度较高时，仍可以使2种同分异构体有效分离，避免彼此干扰，可准确测定活性抗坏血酸的含量。本发明操作简单、化学试剂用量少、提取物稳定性好。检测方法相对标准偏差为7.82％、可以多联检测，对于准确测定乳粉中活性抗坏血酸的真实含量具有重要意义。

专利权项：一种同步测定乳粉中L‑抗坏血酸、D‑抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的方法，其特征在于，所述的方法包括如下操作步骤：1样品预处理：A液制备：称取待检测的乳粉样品置于具塞离心管中，加入经过氮吹除氧的提取液，涡旋溶解并定容；摇匀，超声波处理后离心，吸取部分上清液，另一部分用于制备B液，经水相膜过滤后转移至棕色瓶中，用于测定L‑抗坏血酸和D‑抗坏血酸含量；B液制备：取A液制备中的离心后的上清液于具塞离心管中，加入还原剂，调节pH至7.0～7.2，振荡；再调节pH至2.5～2.8，最后用纯水定容后，溶液经过水相膜过滤后转移至棕色瓶中，用于测定L‑抗坏血酸的总量；2标准溶液配制及标准曲线的绘制：分别称取L‑抗坏血酸、D‑抗坏血酸标准品，用偏磷酸和硫代硫酸钠混合液，溶解、定容配制成单标准品储备液，再分别吸取单标准品储备液配制成混合标准品储备液；再用偏磷酸和硫代硫酸钠混合液将混合标准品储备液适当稀释，配制系列混合标准品工作液，采用高效液相色谱仪进行分析，绘制标准曲线，计算标准回归方程，结果如下：L‑抗坏血酸：y＝46.8x+1.86；D‑抗坏血酸：y＝53.7x‑8.35；线性范围0.5mgL～200mgL；3将步骤1所得样品用高效液相色谱仪器检测，将L‑抗坏血酸、D‑抗坏血酸的峰面积分别代入所述标准回归方程，求得待测物浓度，记为C1和C2；所述高效液相色谱条件为：Agilent G1260型高效液相色谱仪；Agilent反相色谱柱；流动相由磷酸二氢钾和癸胺配制而成，调节pH为2.5～2.8；超声脱气；色谱条件：检测波长为245nm；流速为0.7mlmin；柱温为27℃；进样量为10μl；4结果计算和表述①将C1和C2代入下式计算试样中L‑抗坏血酸或D‑抗坏血酸的含量X1,2=C1,2-C0Vm1000100]]式中:X1，2——试样中L‑抗坏血酸或D‑抗坏血酸的含量；C1，2——由标准回归方程求得的试样中L‑抗坏血酸或D‑抗坏血酸的质量浓度；C0—由标准回归方程求得空白试样中L‑抗坏血酸或D‑抗坏血酸的质量浓度；V——试样的最后定容体积；m——实际称取样品质量；1000——换算系数；100——换算系数；②试样中L‑抗坏血酸的总量计算公式如下：X=C-C0Vm1000F100]]式中:X——试样中总L‑抗坏血酸的含量；C——由标准回归方程求得的试样中总L‑抗坏血酸的质量浓度；C0—由标准回归方程求得空白试样中L‑抗坏血酸或D‑抗坏血酸的质量浓度；V——试样的最后定容体积；m——实际称取样品质量；1000——换算系数；F——2.5，为还原步骤稀释倍数；100——换算系数；③脱氢抗坏血酸含量＝X‑X1其中，X1为L‑抗坏血酸含量，由①中X1计算得到；X为L‑抗坏血酸的总量，由②中X计算得到。

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