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申请/专利权人：中国烟草总公司郑州烟草研究院
摘要：一种改进的卷烟烟气冷凝物Ames试验，其特征在于：包括以下试验步骤：1.平板及细菌的准备，2.顶层琼脂及受试物配制，3.受试物预培养及平板渗入，4.计数菌落及数据统计。本发明的特点在于：实验对象选用对卷烟烟气敏感的TA98和TA100两种菌株作为试验用菌株，活化系统选用5％S9混合液。且由于卷烟烟气含多种物质，有别于纯物质的试验方法，本发明增加了卷烟烟气冷凝物与细菌预培养的步骤，提高了某些化合物的敏感性，试验数据更为准确，更适用于复杂的卷烟烟气基因突变的检测。
主权项：1、一种改进的卷烟烟气冷凝物Ames试验，其特征在于：包括以下试验步骤：1.平板及细菌的准备将1.5％琼脂培养基高压灭菌后，加入磷酸盐储备液和40％葡萄糖溶液，充分摇匀后倒入90mm平皿，每个化学物剂量用三个平板进行平行，制备足够的平板后，放入生化培养箱，37℃培养过夜以除去水分及检查有无污染；随后进行增菌工作，取2个灭菌角烧瓶，加入营养肉汤10mL，刮取少量TA98、TA100菌种，接种至肉汤中；37℃振荡培养10h，使细菌达到1-2×109个mL；2.顶层琼脂及受试物配制将琼脂溶液高压后加入0.5mmoLL组氨酸-生物素溶液，然后以2mL分装于试管，并在45℃水浴中保温；然后配置受试物-卷烟烟气冷凝物及阳性对照，阳性对照分别是，无活化系统时：TA98阳性对照为40μgmL硝基芴，TA100阳性对照为10μgmL；有活化系统时：TA98、TA100阳性对照为20μgmL蒽胺；阴性对照为溶剂对照；3.受试物预培养及平板渗入吸取0.1mL受试物与0.1mL菌液混匀，在37℃条件下，预培养30min；需活化的另加入0.5mL5％S9混合液；之后，取已融化并在45℃水浴中保温的顶层培养基一管2mL，加入0.2mL受试物菌液混合液，活化的加入0.7mL受试物、菌液及S9混合液，迅速混匀，倒入底层平板培养基上，转动平板使顶层培养基均匀分布在底层上，平方固化，37℃培养48h；4.计数菌落及数据统计计数各平板菌落数，并进行结果统计，进而评价烟气冷凝物的致突变性。
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