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申请/专利权人：大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司

摘要：本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生紫雏菊提取菊苣酸的方法，特别是涉及一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法。本发明优点：1、应用酶解及超声波提取技术，有效成分溶出速度快，活性成分损失少。2、超滤是在常温下进行的，因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低，提高了有效成分的收率。

主权项：一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：1酶解：将紫雏菊粉碎，采用一定料液比，加入纤维素酶和果胶酶，比例为1∶0.5，酶浓度为0.5‑1‰，在40‑50℃左右酶解1‑1.5h；2超声提取：采用超声波萃取，超声频率50‑100KHZ，超声时间30‑60min，提取温度40‑50℃；3过滤：静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；4超滤分离：采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2‑0.3MPa，截留率为90‑95％；得菊苣酸半成品粗品，其含量为65％以上；5柱层析：将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200‑300目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70‑90％浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；6回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为95％以上菊苣酸成品。

全文数据：利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法技术领域：[0001]本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生紫雏菊中提取菊苣酸的方法，特别是涉及一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化的新方法。背景技术：[0002]紫雏菊是多年生草本植物，别名紫松果菊，又名紫锥花，是一种菊科野生花卉，因头状花序很像松果而得名。它的形状与普通菊花有些相似，花朵较大，色彩艳丽，外形美观，具有很高的观赏价值，是庭院、公园、街头绿地和街道绿化美化、节日摆花不可缺少的花卉品种之一，全国各地均有栽植。松果菊还具有非常高的药用价值，是目前主要用于治疗感冒、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的一种草药。[0003]原生于北美洲中部及东部，有部份品种现时受到保护。世界各地多有栽培，播种繁殖多于春、秋两季进行，生长健壮，管理简便。花期6-7月。[0004]紫锥菊提取物主要成份菊苣酸是使用最广泛的药用植物，一般用于感冒，牙疼，毒蛇咬伤和其它外伤。美国多年以来应用其作为增强免疫系统和清血的替代医药，特别是在季节变化和感冒咳嗽多发季节。[0005]紫锥菊是国际医药学界公认的具有神奇的“骨髓保存”作用的深度免疫植物，是己知药理作用最多、功效最强大的国际规范植物药之一，在欧美被誉为“全康复免疫专家”，也是最具有应用前景的“净血之王”的植物抗生素。从1979年有明确统计数字以来，连续25年雄居植物药和草药保健品销量前3位，成为《免疫康泰论》、整体医学和欧洲COST机构公认的植物药王。14个药理作用，对145种疾病有明确显著疗效，世上罕有、百年流传。发明内容：[0006]本发明优点：[0007]本发明主要采用酶解技术，超声波萃取，采用乙醇做提取剂，提取时间短，有效成分活性高；后期采用柱层析纯化，纯化效果好。本发明方法简单易操作，适合大生产，成本低，选用食品允许使用的乙醇，无化学残留。[0008]为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：[0009]—种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：[0010]1酶解:将紫雏菊粉碎，采用一定料液比，加入纤维素酶和果胶酶，比例为1:0.5，酶浓度为〇•5_1%。，在40-50°C左右酶解1-1.5h;[0011]⑵超声提取:采用超声波萃取，超声频率50-100KHZ，超声时间30-60min，提取温度40-50°C;[0012]3过滤:静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；[0013]⑷超滤分离:采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为90-%%;得菊苣酸半成品粗品，其含量为65%以上；[0014]¾柱层析:将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200-300目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90%浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；[0015]⑹回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为95%以上菊苣酸成品。_6]所述步骤⑴中，粉碎过4〇_8〇目筛，料液比为丨：1〇—12。具体实施方式：[0017]实施例丨：一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：_8]1酶解:将紫雏菊粉碎，过60目筛，料液比1:1〇,加入纤维素酶和果胶酶，比例为1:0•5，酶浓度为0•5%。，在4〇°c左右酶解1_5h;[0019]2超声提取：酶解后采用超声波萃取，超声频率i〇〇KHZ，超声时间30min，提取温度5TC;[0020]3过滤:静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；[0021]⑷超滤分离:采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为0.2-0.3MPa，截留率为9〇-95%;得菊苣酸半成品粗品，其含量为65.3%;[0022]_5柱层析:将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70%、75%、80%、85%、90%浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；[0023]⑹回收乙醇，洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为95.6%的菊苣酸成品。[0024]实施案例2:一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：[0025]1酶解:将紫雏菊粉碎，过80目筛，料液比1:12,加入纤维素酶和果胶酶，比例为1:0.5，酶浓度为1%。，在40°C左右酶解lh;[0026]2超声提取:酶解后采用超声波萃取，超声频率100KHZ，超声时间60min，提取温度50。。；[0027]⑶过滤:静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；[0028]4超滤分离:采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为〇•2_〇.3MPa，截留率为90-95%;得菊苣酸半成品粗品，其含量为67.丨％;[0029]_5柱层析:将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用7〇%、75%、80%、85%、9〇%浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；[0030]⑹回收乙醇，洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为96.3%的菊苣酸成品。[0031]实施案例3:—种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：L解:将紫雏菊粉碎，过40目筛，料液比1:12,加入纤维素酶和果胶酶，比例为1:0•5，酶浓度为1%。，在4〇X：左右酶解丨.5h;[0033]2超声提取:酶解后采用超声波萃取，超声频率50KHZ，超声时间40min，提取温度50°C；[0034]3过滤:静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；[0035]⑷超滤分离:采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为〇.2-0•3MPa，截留率为90-95%;得菊苣酸半成品粗品，其含量为66.4%;[0036]5柱层析:将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70%、75%、80%、85%、90%浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；[0037]⑹回收乙醇，洗脱液浓缩，冷冻千燥，得到含量为95.8%的菊苣酸成品。

权利要求：1.一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其步骤如下：1酶解:将紫雏菊粉碎，采用一定料液比，加入纤维素酶和果胶酶，比例为1:0.5,酶浓度为0.5_1%。，在40-50°C左右酶解l-1.5h;⑵超声提取:采用超声波萃取，超声频率50-100KHZ，超声时间30-60min，提取温度40-50。。；03过滤:静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩，回收乙醇，得菊苣酸粗提物；⑷超滤分离:采用一定截留分子量的超滤膜分离，膜操作压力为〇.2-0.3MPa，截留率为90-95%;得菊苣酸半成品粗品，其含量为65%以上；5柱层析:将所得菊苣酸半成品粗品溶于乙酸乙酯，上200-300目硅胶层析柱对提取物进行再次纯化，用水洗掉杂质，再用70-90%浓度的乙醇洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集菊苣酸各阶段洗脱液；⑹回收乙醇，收集洗脱液浓缩，冷冻干燥，得到含量为95%以上菊苣酸成品。2.根据权利要求1所述的一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其特征是:在所述的步骤（D中，料液比为丨：，粉碎目数为40-80。3.根据权利要求2所述的一种利用酶解技术、超声波提取、超滤分离再结合柱层析纯化紫雏菊中菊苣酸的新方法，其特征是：在所述的步骤4中，超滤膜截留分子量为1000一6000〇

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