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基于DNA无模板扩增和金属离子-谷胱甘肽开关的电化学逻辑运算方法 

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申请/专利权人:宁波大学

摘要:本发明公开了基于DNA无模板扩增和金属离子‑谷胱甘肽开关构建了一系列电化学逻辑运算方法,具体步骤如下:金电极Au预处理,然后取DNA溶液滴涂于Au表面,在4℃冰箱孵育过夜,巯基己醇MCH处理;将蒸馏水、TdT缓冲液、dNTPdTTP+dGTP、TdT,混合均匀,滴于电极表面;聚合反应后,再加入缓冲液Tris‑HCl,KCl,pH7.4,室温孵育;向上述电极上滴加hemin,室温孵育。以上每一步制备电极后,用蒸馏水缓缓冲洗电极以除去杂质。构建了两个NOT逻辑门、两个IMPLY逻辑门以及一个NOR逻辑门。优点是制备简单、检测速度快、结果准确可靠、成本低。

主权项:1.基于DNA无模板扩增和金属离子-谷胱甘肽开关构建了一系列电化学逻辑运算方法,其特征在于,机理如下:本发明提出了基于DNA无模板扩增和金属离子-谷胱甘肽开关的电化学逻辑运算方法,利用脱氧核苷酸末端转移酶TdT催化三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸dTTP和三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸dGTP随机聚合到到巯基DNA3’-OH端,形成一条富含G碱基的DNA长链也含有若干T碱基,在引入血红素hemin后,该富GDNA长链可以形成G-四链体结构具有类辣根过氧化物酶性质,并对H2O2具有电催化活性,产生较强的电化学信号。之后,研究了银离子Ag+和汞离子Hg2+对G4结构的破坏作用,Ag+可通过与碱基鸟嘌呤G螯合破坏G4结构,Hg2+能通过形成T-Hg2+-T破坏G4结构,导致电化学信号消失。然而,含巯基的谷胱甘肽GSH能够与Ag+和Hg2+可以发生较强的配位作用从而阻碍这一破坏进程,使得电化学信号得以恢复。

全文数据:

权利要求:

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