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申请/专利权人：杭州博茵生物技术有限公司
摘要：本发明属于酶工程技术领域，尤其是涉及一种CK‑MB型肌酸激酶同工酶、制备方法及应用。通过本发明所提供的制备方法所得到的CK‑MB型肌酸激酶同工酶的产率较高，M亚基蛋白和B亚基蛋白等比例复性后的得率为35mgL；通过本发明的制备方法所得到的CK‑MB型肌酸激酶同工酶用罗氏肌酸激酶同工酶检测试剂盒（电化学发光法）进行定量检测，其活性率大于41%。本发明所提供的CK‑MB型肌酸激酶同工酶的制备方法操作简单、成本低、产率高，所制备得到的CK‑MB型肌酸激酶同工酶的生物活性高，稳定性好，可以用于体外诊断中质控品或者校准品，也可以用作免疫原或者筛选原用于肌酸激酶同工酶抗体开发。
主权项：1.一种CK-MB型肌酸激酶同工酶的制备方法，其特征在于，所述CK-MB型肌酸激酶同工酶的制备方法包括如下步骤：（1）以优化后的人源化肌酸激酶同工酶基因为模板，基因序列为SEQIDNO.1，以基因序列为SEQIDNO.3、SEQIDNO.4的基因为引物进行PCR扩增，得到M亚基基因片段；以优化后的人源化肌酸激酶同工酶基因为模板，基因序列为SEQIDNO.2，以基因序列为SEQIDNO.5、SEQIDNO.6的基因为引物进行PCR扩增，得到B亚基基因片段；（2）将M亚基基因片段、B亚基基因片段分别插入至表达载体pET28a+，形成pET28a-CKM与pET28a-CKB；（3）将pET28a-CKM与pET28a-CKB分别热激法转化表达宿主菌，并用IPTG诱导表达，然后离心分离菌体，超声破碎，并过Ni2+-NTA柱纯化目的蛋白，分别得到高纯度的M亚基蛋白和B亚基蛋白；（4）将高纯度的M亚基蛋白和B亚基蛋白稀释后等比例混合，形成CK-MB型肌酸激酶同工酶二聚体蛋白。
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权利要求：
百度查询： 杭州博茵生物技术有限公司 一种CK-MB型肌酸激酶同工酶、制备方法及应用
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