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构建Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型的方法和应用 

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申请/专利权人:郑州大学

摘要:本发明提供构建Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型的方法和应用,涉及疾病动物模型及其制备技术领域,所述方法包括:设计仓鼠Tp53基因特异性打靶序列、制备Tp53的打靶质粒载体pX330‑sgRNA、将pX330‑sgRNA显微注射至仓鼠受精卵的细胞核中、然后移植入受体母仓鼠内,F0代仓鼠出生,经鉴定该方法成功构建了Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型。本发明阐述了第一个敲除Tp53基因的金黄叙利亚仓鼠的癌症表型,与Tp53突变的人类癌症类似,在Tp53‑‑仓鼠模型发现多种类型的肉瘤,包括血管肉瘤、骨肉瘤,及低频癌,组织包括肾、胰腺和肾上腺。采用本发明所述方法制备的仓鼠模型能够补充当前小鼠模型,有利于研究Tp53缺乏症导致的人类癌症是如何发生发展,并为新型疗法的研究提供有效动物模型。

主权项:1.构建Tp53基因敲除金黄叙利亚仓鼠模型的方法,其特征在于,所述方法利用CRISPRCas9技术建立Tp53基因敲除的金黄叙利亚仓鼠,敲除序列如SEQIDNO:1所示;所述方法包括以下步骤:1设计仓鼠Tp53基因特异性打靶序列,选择第5外显子上序列作为CRISPR作用的靶点设计sgRNA,所述sgRNA序列如SEQIDNO:2所示;2利用pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9质粒以下简称pX330质粒获得Tp53的打靶质粒载体pX330-sgRNA,所述pX330质粒购自Addgene公司,Addgene编号:42230;3将所述步骤2制备得到的pX330-sgRNA注射至仓鼠受精卵细胞核中,然后移植入受体母仓鼠内,F0代仓鼠出生,鉴定。

全文数据:

权利要求:

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