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一种人源化FKBP8基因敲入动物模型及其构建方法 

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申请/专利权人:深圳先进技术研究院

摘要:本发明提供了一种人源化FKBP8基因敲入动物模型的构建方法,包括(1)构建人源化FKBP8基因敲入的打靶载体,将打靶载体、Cas9、sgRNA转染到供体动物受精卵中;(2)将成活的受精卵细胞移植入假孕动物输卵管中,得到F0代动物,对F0代动物进行鉴定,同源重组呈现阳性的动物即为嵌合体动物;(3)将嵌合体动物与野生型动物交配,获得F1代动物并进行鉴定,同源重组呈现阳性的F1动物即为人源化FKBP8基因敲入动物。本发明提供的构建方法采用人源FKBP8基因序列替换供体动物FKBP8基因序列,以实现供体动物FKBP8基因人源化的目的,成功建立了人源化FKBP8基因敲入动物模型,可实现在动物模型上筛查靶向FKBP8基因及其产物的药物或研究FKBP8基因及其产物在相关临床疾病中的发病及治疗机制。

主权项:1.一种人源化FKBP8基因敲入动物模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)构建人源化FKBP8基因敲入的打靶载体,将打靶载体、Cas9、sgRNA转染到供体动物受精卵中;(2)将成活的受精卵细胞移植入假孕动物输卵管中,得到F0代动物,对F0代动物进行鉴定,同源重组呈现阳性的动物即为嵌合体动物;(3)将嵌合体动物与野生型动物交配,获得F1代动物并进行鉴定,同源重组呈现阳性的F1动物即为人源化FKBP8基因敲入动物;其中:所述步骤(1)具体为:基于CRISPRCas9开发的EGE系统设计打靶策略,使用人FKBP8基因胞外区替换供体动物FKBP8基因胞外区,sgRNAs分别设计在供体动物FKBP8基因Exon2及Exon8中;在5’端和3’端靶点区域设计sgRNAs,检测体外活性,结合sgRNA特异性和切割位置,选择sgRNAs,将sgRNAs以及Cas9进行体外转录,制备用于显微注射的RNA;根据打靶方案,构建重组打靶载体,将重组打靶载体、Cas9、sgRNAs转染到供体动物受精卵中;所述步骤(1)中在5’端靶点区域设计4条sgRNAs,序列如SEQIDNO.1-4所示;在3’端靶点区域设计4条sgRNAs,序列如SEQIDNO.5-8所示;选择活性最高的5’靶位点和3’靶位点进行下一步的实验;所述步骤(2)中采用PCR对F0代动物进行基因型鉴定;引物序列如SEQIDNO.9-12所示。

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权利要求:

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