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申请/专利权人：鲁东大学;山东百思禾未来农业科技发展有限公司

摘要：本发明公开了一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，包括乌木外植体的选取、乌木外植体的无菌处理、愈伤组织和芽的诱导、芽的增殖、生根培养、驯化移栽等步骤。本发明采用上述的一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，用乌木叶片和花剑成功诱导分化形成再生植株，极大提高了各部分的利用率，显著提高了外植体的再生频率，为乌木组培快繁奠定了坚实基础，为乌木种苗产业化生产、新品种创制及品质遗传改良等提供技术支持。

主权项：1.一种乌木的组织培养快速高效繁殖方法，其特征在于，包括下列步骤：1乌木外植体的选取：分别选取乌木叶片和花剑作为组培外植体；2乌木外植体无菌处理：在超净工作台内使用75％酒精、无菌水、0.1％升汞消毒液对所述外植体进行消毒处理；3愈伤组织和芽的诱导：将经过消毒的所述外植体转移到无菌接种盘内，用无菌滤纸吸去所述外植体表面多余水分，然后对所述外植体进行裁剪，将裁剪后的所述外植体接种到培养基上进行培养，培养后的所述外植体切口边缘处形成大量绿色愈伤组织，随后所述愈伤组织上形成潜在的芽点，再逐渐分化成肉眼可见的绿色不定芽；所述愈伤组织和所述不定芽的诱导培养基均为改良B5培养基+6-BA3.0mgL+NAA0.2mgL+蔗糖30gL+琼脂8gL，pH为5.7-5.8，所述培养的温度为25±2℃，光照时间为16hd，所述培养的时间为7-10d左右；4芽的增殖：在所述超净工作台中将所述不定芽分丛，每个不定芽丛中含有1-3个所述不定芽，用无菌解剖刀在所述不定芽的基部轻轻制造一些伤口，然后将所述不定芽丛接种于不定芽增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基为改良B5培养基+6-BA1.0mgL+NAA0.2mgL+蔗糖为30gL+琼脂8gL，pH为5.7-5.8，所述增殖培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16hd；5生根培养：步骤4中的所述不定芽长至2-3cm大小时，在所述超净工作台上从所述不定芽丛基部分开切下单个所述不定芽，并将其转入组培瓶中进行生根培养，所述组培瓶内有生根培养基，所述生根培养基为改良B5培养基+IBA0.5mgL+椰子汁90gL+蔗糖30gL+琼脂8gL，pH为5.7-5.8，所述生根培养的培养温度为25±2℃，光照时间为16hd；6驯化移栽：步骤5的所述不定芽基部长出的不定根达到2-3cm后，将所述组培瓶打开瓶盖，继续培养3-5d天后，将组培苗从所述组培瓶中取出，洗掉根部残留的所述生根培养基，移栽进基质，在湿度为50％-60％的条件下培养7d，然后再在温室下正常培养。

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