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申请/专利权人：四川省太鸿沅农业集团有限公司

申请日：2020-12-25

公开（公告）日：2023-06-06

公开（公告）号：CN112553283B

专利技术分类：

专利摘要：本发明提供了一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法，解决了现有技术中棕榈烯酸来源受到限制，难以满足市场的需求的技术问题。它包括下述步骤：（1）以山桐子废液制备发酵用培养液；（2）复合微藻发酵；（3）破壁萃取；（4）油脂分离纯化，得到山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸。本发明利用高产油的绿球微藻为出发菌，以山桐子废液制备利于绿球微藻菌生长的培养液，通过自养、异样结合发酵，将培养后的菌体干燥提取后进行分离纯化得到高纯度的山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸，弥补了棕榈烯酸产量的不足，扩大了棕榈烯酸的来源，能更好的满足市场的需求。

专利权项：1.一种利用复合微藻发酵山桐子废液制备山桐子棕榈烯酸的方法，其特征在于：包括下述步骤：（1）以山桐子废液制备发酵用培养液向山桐子废液中加入KH2PO4、MgSO4‧7H2O、CaCO3、Na2SO4、FeSO4‧7H2O、吲哚丁酸（IBA）、葡萄糖、麦芽糖、牛肉浸膏和氨基酸，得到发酵用培养液；（2）复合微藻发酵以裂殖壶菌和绿球微藻菌在步骤（1）得到的培养液中协同自养异养结合发酵，得到发酵后的菌体；（3）破壁萃取将步骤（2）得到的发酵后的菌体依次经过离心脱水、浓缩、干燥、破壁和有机溶剂萃取方式提取，得到山桐子油脂肪酸乙酯；（4）油脂分离纯化将得到的山桐子油脂肪酸乙酯通过尿素包埋、分子蒸馏分离纯化得到山桐子棕榈烯酸和山桐子二十二碳六烯酸；所述步骤（1）中，所述山桐子废液的制备是以山桐子鲜果为原料，经液压压榨后得到液态料和固体料，将得到的液态料经一次离心除杂、酶解脱胶、二次离心脱水得到山桐子初榨油和山桐子废液；所述酶解脱胶采用的酶解剂为浓度为7800～8200Uml的磷脂酶A1；所述步骤（2）中，采用前期自养发酵、后期异养发酵的混养发酵方式培养绿球微藻菌；所述自养发酵为：培养液温度为24～26℃；pH值为6.1～6.5；搅拌速率18～22rmin；接种量：裂殖壶菌5.3%～5.7%，绿球微藻菌3.8%～4.2%；自养发酵时长为69～75h，蓝光光照23～25h，避光23～25h，红光光照23～25h；所述异养发酵为：培养液温度为24～26℃；pH值为6.1～6.5；搅拌速率18～22rmin；接种量：裂殖壶菌5.3%～5.7%，绿球微藻菌3.8%～4.2%；采取补料分批发酵方式使培养液内的葡萄糖浓度24gL，异养发酵时长为69～75h；所述步骤（4）中，所述尿素包埋包括下述步骤：①在反应釜中，加入尿素和95%乙醇，保持温度为70～80℃回流搅拌直至尿素全部溶解；②将山桐子油脂肪酸乙酯加入反应釜中，在温度为70～80℃继续回流搅拌，回流0.8～1.2h使脂肪酸和尿素充分混匀后停止反应，将混合液在室温下冷却40-50min；③将步骤②冷却后的混合液转移至温度为78-82℃继续结晶，结晶结束后压力过滤，收集滤液和固相物；加入乙醇洗涤结晶物继续抽滤，继续收集滤液和固相物；④将步骤③收集的滤液混合并用旋转蒸发仪除去乙醇，倒入分液漏斗分液，用等体积热水水洗至少3次，静置分层除去残留的尿素，从分液漏斗上端倒出含有山桐子棕榈烯酸的山桐子油脂肪酸乙酯，称重后0-4℃避光保存；⑤步骤③收集的固相物加入热水破坏尿素结晶，经分液漏斗分液得到固相物中的脂肪酸乙酯；所述步骤（4）中，进行分子蒸馏时，将步骤（4）④中得到的含山桐子棕榈烯酸的山桐子油脂肪酸乙酯进行分子蒸馏，蒸馏温度为115～125℃、转速150～170rmin，进料速率为1.4～1.6mLmin，蒸馏后得到山桐子棕榈烯酸；将步骤（4）⑤中得到的脂肪酸乙酯进行分子蒸馏，蒸馏温度为115～125℃、转速150～170rmin，进料速率为1.4～1.6mLmin，蒸馏后得到山桐子二十二碳六烯酸。

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