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申请/专利权人：江南大学
摘要：本发明公开了一种高产β‑榄香烯和germacreneA的重组菌的构建方法。首先，通过germacreneA合成酶的筛选和甲羟戊酸代谢途径的过表达实现β‑榄香烯和germacreneA的从头合成；然后，通过删除中心碳途径中的竞争途径确保了类异戊二烯途径中乙酰辅酶A、丙酮酸和甘油醛‑3‑磷酸的可用性；接着采用番茄红素颜色作为高通量筛选方法，通过易于出错的PCR诱变获得了优化的NSY305N。最后，在摇瓶中，通过关键途径酶、外排工程和翻译工程的最终构建的菌株β‑EL‑4产生了1161.09mgL的β‑榄香烯和852.36mgL的germacreneA，是目前报道的摇瓶水平的最高产量，在4‑L补料分批发酵中，β‑榄香烯和germacreneA的产量分别达到3.52gL和2.13gL。
主权项：1.一种高产β-榄香烯和germacreneA的重组菌的构建方法，其特征在于：包括，选择β-榄香烯从头生物合成效率高的合成酶；通过过表达酶ispA提高β-榄香烯的产量；再通过RBS工程或蛋白融合技术进一步提高β-榄香烯的产量；改写中心碳代谢途径提高前体积累；高通量筛选定向进化酶NS，获取高活性的NS酶；代谢调控回流积累的丙酮酸提高β-榄香烯的产量；调节外排泵促进β-榄香烯的产生；构建得到高产β-榄香烯和germacreneA的重组菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 江南大学 一种高产β-榄香烯和germacrene A的重组菌的构建方法
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