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申请/专利权人：天津大学前沿技术研究院有限公司
摘要：本发明公开了生产游离脂肪酸重组大肠杆菌及其构建方法和用途，其构建方法为：构建重组质粒pacrD_2252；以重组质粒pacrD_2252为模板，扩增得到sg‑acrD_2252表达盒；将sg‑acrD_2252表达盒酶切链接到重组质粒pCFp，构建重组质粒pCFpa；将重组质粒pCFpa转化到合成游离脂肪酸重组大肠杆菌底盘MG1655DE3‑ΔfadE中，得到重组大肠杆菌pcnBi‑acrDi；该重组大肠杆菌菌株pcnBi‑acrDi能够通过调控细胞内源与脂肪酸代谢非直接相关的基因的表达以甘油为碳源高效合成游离脂肪酸，试管培养得到4120mgL游离脂肪酸，相对于菌株CF提高了451％。
主权项：1.生产游离脂肪酸重组大肠杆菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：1将靶向大肠杆菌MG1655DE3内源基因acrD的acrD_2252片段与pTargetF_lac_preLib质粒酶切连接，构建重组质粒pacrD_2252；所述基因acrD的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示；所述acrD_2252片段的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；2以重组质粒pacrD_2252为模板，以sg-acrD_2252-F和sg-acrD_2252-R为上、下游引物，扩增得到sg-acrD_2252表达盒；所述sg-acrD_2252-F的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示；所述sg-acrD_2252-R的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；所述sg-acrD_2252表达盒的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示；3将sg-acrD_2252表达盒酶切链接到重组质粒pCFp，构建重组质粒pCFpa；所述pCFpa质粒的核苷酸序列如SEQIDNO.20所示；4将重组质粒pCFpa转化到合成游离脂肪酸重组大肠杆菌底盘MG1655DE3-ΔfadE中，得到重组大肠杆菌pcnBi-acrDi。
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权利要求：
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