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一种医用重组胶原蛋白及其发酵生产的方法和应用 

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申请/专利权人:广州岳铧医疗科技有限公司

摘要:本发明提出了一种医用重组胶原蛋白及其发酵生产的方法和应用,包括取毕赤酵母GS115,接种至诱导培养基中,进行磁化诱导处理后,加入甲醇溶液,进行二次磁化诱导处理,接种量接种至扩大培养基中,培养,将扩大培养液接种至发酵培养基中,培养,离心,取上清液,进行纯化除盐,得目标重组胶原蛋白。本发明纯化获得的重组胶原蛋白具有良好的抗氧化能力,其对DPPH自由基的清除率达到76%;该重组胶原蛋白可应用于表皮创面敷料,其不被表皮所吸收,符合Ⅱ类医用敷料应用的要求,可作为医用重组胶原蛋白应用于医用敷料。

主权项:1.一种医用重组胶原蛋白的发酵生产方法,其特征在于,包括如下步骤:S1取毕赤酵母GS115,以1~2%接种量接种至诱导培养基中,以27~28℃培养15~20h,得培养液;S2取培养液,以1~2%接种量接种至扩大培养基中,以27~28℃、200~220rpm培养40~55h,得扩大培养液;S3将扩大培养液以4~5%接种量接种至发酵培养基中,进行一次磁化诱导处理后,加入甲醇溶液,进行二次磁化诱导处理,在27~28℃的温度条件下,将发酵培养分为发酵前段6~10h、发酵中段8~20h和发酵后段6~20h的三段培养模式,离心,取上清液,得含有重组胶原蛋白的上清液;一次磁化诱导处理的磁场强度为150mT,磁化处理的时间为20min,二次磁化诱导处理的磁场强度为100mT,磁化处理的时间为60min;所述发酵前段6~10h,使发酵液的溶氧量保持25~30%;所述发酵中段8~20h,使发酵液的溶氧量保持35~40%,开始以流速梯度的方式进行补料发酵,以初始速率5~6mLhL流加葡萄糖溶液,以速率5~6mLhL进行梯度递增,最终保持25~28mLhL的流加速率,同时流加乙酰肌肽;所述发酵后段6~20h,将流速梯度的方式调整为恒速补料和出料的发酵模式,以速率12~15mLhL进行流加葡萄糖溶液,待发酵液中葡萄糖溶液的浓度6gL时,进行出料处理,出料处理后,以速率5~6mLhL进行流加葡萄糖溶液至发酵结束;每1L所述诱导培养基包括以下重量的组分:酵母粉0.8~1.2g、蛋白胨2.1~2.5g、葡萄糖2.1~2.5g、乙酰肌肽180~220µg和混合液0.8~1.2g;每1L所述扩大培养基包括以下重量的组分:酵母粉0.8~1.2g、蛋白胨2.5~2.8g和葡萄糖3~4g;每1L所述发酵培养基包括以下重量的组分:酵母粉0.8~1.2g、蛋白胨2.1~2.5g、葡萄糖2.1~2.5g和混合液0.8~1.2g;所述混合液包括七水合硫酸亚铁0.8~1.2gL、七水合硫酸锌0.2~2gL、磷酸二氢钾1.5~2.5gL、一水合硫酸锰0.2~0.5gL和生物素0.05~0.08gL;S4将含有重组胶原蛋白的上清液进行纯化除盐,得目标重组胶原蛋白。

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