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申请/专利权人：桂林电子科技大学

摘要：基于RGO‑CMCS‑HeminPt@PdNPs比色传感器检测GP73的方法，将氨基化的GP73适配体通过π‑π共轭及静电吸附作用与所得纳米材料结合，先形成RGO‑CMCS‑HeminPt@PdNPs‑GP73Apt识别探针，再形成AptΙGP73RGO‑CMCS‑HeminPt@PdNPs‑GP73Apt夹心型复合结构；该复合结构催化H2O2分解为H2O和O2，进而将TMB氧化为oxTMB，使溶液由无色变为深蓝色，利用紫外‑分光光度计测量652nm处的紫外吸收峰，对比吸光度的差异，从而实现GP73的检测。

主权项：1.一种非诊断目的基于还原性氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素纳米铂@钯纳米材料RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs的比色传感器检测GP73的方法，其特征在于，按以下步骤进行：步骤1：RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs-GP73Apt识别探针的制备（1）还原性氧化石墨烯RGO的制备称取氧化石墨烯GO倒入纯水中，破碎均匀，按照1：2的体积比加入抗坏血酸AA还原，得到RGO悬浮液；（2）还原性氧化石墨烯-氯化血红素RGO-Hemin的制备将氯化血红素Hemin加入氨水至纯水中溶解，得到Hemin溶液；在RGO溶液加入Hemin溶液，搅拌反应，得到RGO-Hemin悬浮液；（3）还原性氧化石墨烯-羧甲基壳聚糖-氯化血红素RGO-CMCS-Hemin的制备在RGO-Hemin悬浮液中加入羧甲基壳聚糖CMCS溶液，10mmolL1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐N-羟基琥珀酰亚胺EDCNHS进行活化，搅拌反应，得到RGO-CMCSHemin溶液；（4）RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs纳米材料制备在RGO-CMCS-Hemin溶液中加入20mM氯铂酸钠Na2PtCl6、20mM氯钯酸钠Na2PdCl6和水合肼N2H4﹒H2O，搅拌反应，得到RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs溶液；（5）RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs-GP73Apt识别探针的制备将GP73Apt溶液和RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs溶液混合，孵育，得到RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs-GP73Apt识别探针；步骤2：比色生物传感界面的构建（1）将未修饰的3μmolLGP73适配体AptΙ溶液室温孵育，加入1%牛血清白蛋白BSA溶液封闭；（2）将5μgmLGP73溶液滴加到AptΙ溶液中，孵育，得到AptΙGP73溶液；（3）在AptΙGP73溶液中滴加RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs-GP73Apt溶液，孵育，得到AptΙGP73RGO-CMCS-HeminPt@PdNPs-GP73Apt溶液；步骤3：GP73工作曲线及标准曲线的绘制（1）在pH为4.0的含有显色体系TMB-H2O2的磷酸盐缓冲液中加入步骤2得到的溶液，进行反应，采用紫外-分光光度计的分光光度法进行测量，记录传感器在652nm处的吸光度；（2）分别对不同浓度的GP73进行检测，记录吸光度；根据传感器的吸光度与GP73浓度的关系，绘制GP73的工作曲线及标准曲线，计算出该方法的最低检测限；步骤4：实际血清样本中GP73的检测（1）将待测实际血清样本加入步骤2得到的溶液，再加入含有显色体系TMB-H2O2的磷酸盐缓冲溶液，反应10min，采用紫外-分光光度计的分光光度法进行测量，记录传感器在652nm处的吸光度；（2）根据步骤3所得到的工作曲线及标准曲线，计算待测实际血清样本中GP73的浓度。

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