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申请/专利权人：天津师范大学
摘要：本发明公开了一种提取单个摇蚊科蛹期蜕皮DNA的方法。属于动物分子生物学技术领域。该方法包括如下步骤：预处理、裂解离心、洗脱、富集、酶解、抽提、离心、沉淀、溶解、扩增和电泳检测。与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：用蒸馏水处理用以去除杂质，防止干扰提取；通过0.9％NaCl溶液缓慢的渗透作用影响，能使摇蚊蛹期蜕皮上残存的细胞在温和的状态下，逐渐恢复生理活性，并促使细胞中交联的蛋白质与DNA逐步解离；采用本发明方法提取的摇蚊科蛹期蜕皮DNA浓度可达到0.908ngμl，纯度可达到1.89。
主权项：1.一种提取单个摇蚊科蛹期蜕皮DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：1预处理：经过蒸馏水除杂和0.9％NaCl溶液浸泡处理得到预处理摇蚊蛹期蜕皮；所述蒸馏水除杂操作步骤为：取单个摇蚊蛹期蜕皮，使用25℃蒸馏水浸泡5～8min，之后更换蒸馏水重复1次；所述0.9％NaCl溶液浸泡处理操作步骤为：蒸馏水除杂后，使用0.9％NaCl溶液浸泡1h，之后更换0.9％NaCl重复2次；蒸馏水和0.9％NaCl溶液的添加量均为完全没过摇蚊蛹期蜕皮1～2cm高度；2裂解离心：取预处理摇蚊蛹期蜕皮加入裂解液进行研磨，之后8000rpm离心1min，取上清液1；所述裂解液的成分包括：终质量浓度2％的CTAB、终质量浓度0.5％的SDS、0.03M的EDTA、0.1M的Tris-HCl、1M的NaCl、终质量浓度1％的PVP和终质量浓度0.1％的β-巯基乙醇；将所述预处理摇蚊蛹期蜕皮先处理成长、宽均小于2mm的小段；3洗脱、富集：将所述上清液1经过硅胶膜离心吸附柱洗脱后得到摇蚊蛹期蜕皮粗DNA；洗脱液成分包括10mmolL的Tris-HCl和1mmolL的EDTA，pH＝8.5；4酶解：使用蛋白酶K和RNA酶对摇蚊蛹期蜕皮粗DNA进行酶解，得酶解液；5抽提、离心、沉淀、溶解：将酶解液依次经氯仿-异戊醇、等体积的饱和酚和氯仿-异戊醇、异丙醇和75％乙醇处理后，即得到摇蚊蛹期蜕皮DNA，之后用ddH2O进行溶解；6扩增、电泳检测。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津师范大学 一种提取单个摇蚊科蛹期蜕皮DNA的方法
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