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申请/专利权人：中南民族大学;武汉帕默康创药物研究开发有限公司

摘要：本发明公开了一种监测西酞普兰血药浓度的方法及试剂盒。该方法采用二维色谱仪系统，包括制备溶液、设置色谱参数、实施检测、计算含量。通过一维柱色谱条件、二维柱色谱条件、大体积进样条件和阀切换条件系统的配合，建立了方法学研究，通过严格的加样回收试验，验证了回收率在95％～105％之间。本发明方法操作简单，大大减少溶剂消耗；且专属性强，灵敏度高、线性范围宽，准确度高，能快速有效地检测血液样品中的西酞普兰含量，缩减了临床诊断时间，极大的节约时间和成本。可在各种医院治疗中广泛应用于西酞普兰的血药浓度快速检测和精准治疗，有效避免病人治疗的不良反应和中毒事件，还可用于科研机构研究人体药物代谢及血药成分快速分析。

主权项：1.一种监测西酞普兰血药浓度的方法，采用二维液相色谱仪系统，二维液相色谱仪系统为ThermoUltimate3000SD系统，包括带在线脱气单元的双三元梯度泵DGP-3600SD、自动进样器WPS-3000SL、辅助泵AXPPump、带有一个六通阀的柱温箱TCC-3000RS和检测器DAD-3000，其特征在于，所述方法包括以下具体步骤：S1、制备溶液：空白血浆溶液：采用蛋白沉淀剂稀释正常人空白血浆制成血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为空白血浆性溶液；系统适用性溶液：取西酞普兰溶液和正常人空白血浆适量，混匀，采用蛋白沉淀剂稀释制成浓度为M的西酞普兰的血浆溶液，离心过滤取其续滤液，得到的续滤液作为系统适用性溶液；标准曲线溶液：制备不同浓度的西酞普兰溶液，得到的不同浓度的标准曲线溶液；供试品溶液：取正在进行西酞普兰治疗的患者的人体血浆，加入蛋白沉淀剂后离心过滤，得到的续滤液作为所述供试品溶液；S2、设置色谱参数在所述二维液相色谱仪系统上设置一维柱色谱条件的参数、二维柱色谱条件的参数、大体积进样条件的参数和阀切换条件的参数，并使用所述空白血浆溶液和所述系统适用性溶液确认，其中，所述一维柱色谱条件的参数：一维柱为MFPh-1S-5固相萃取柱，规格为4.0mml.D.×10mm；一维洗脱液包括一维流动相A和一维流动相B，所述一维流动相A为甲醇，所述一维流动相B为水；一维洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为0-8.0min，流速为0.2mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比为5：95；8.0-8.2min，流速由0.2mLmin改变为1.5mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比由5：95改变为90：10；8.2-9.7min，流速为1.5mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比为90：10；9.7-9.9min，流速为1.5mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比由90：10改变为5：95；9.9-11.4min，流速为1.5mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比为5：95；11.4-11.6min，流速由1.5mLmin改变为0.2mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比为5：95；11.6-15.0min，流速为0.2mLmin，一维流动相A：一维流动相B体积比为5：95，所述二维柱色谱条件的参数：二维柱为AcclaimTM120C18色谱柱色谱柱，规格为250×4.6mm，5μm；二维洗脱液包括二维流动相A和二维流动相B，所述二维流动相A为乙腈，所述二维流动相B为0.1％醋酸铵缓冲溶液；二维洗脱方式为等度洗脱，所述等度洗脱程序为0-15min，流速为1.0mLmin，二维流动相A：二维流动相B体积比为37：63；一维色谱与二维色谱阀切换程序为：0.1min-3.0min阀1切换至阀2，3.0min-6.5min阀1切换至阀6，6.5min阀1切换至阀2；检测波长：239nm，柱温：28℃，进样量400μL；所述AXPPump泵入水的梯度为：0-3min，流速为1.2mLmin；3-3.1min，流速由1.2mLmin改变为0.1mLmin；3.1-14.5min，流速为0.1mLmin；14.5-14.8min，流速由0.1mLmin改变为1.2mLmin；14.8-15.0min，流速为1.2mLmin；S3、实施检测将所有不同浓度的所述标准曲线溶液和所述供试品溶液分别注入所述二维液相色谱仪系统，记录色谱图；S4、计算含量分析得到所有所述标准曲线溶液对应的西酞普兰的峰面积，绘制西酞普兰的标准曲线，分析得到供试品溶液对应的西酞普兰的峰面积，按外标法，计算得到供试品溶液中西酞普兰的含量。

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