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申请/专利权人：广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所
摘要：本发明公开了快速鉴别瓜实蝇和南亚果实蝇的HRM引物、试剂盒及方法。本发明首先基于瓜实蝇和南亚果实蝇线粒体基因组设计合成用于区分两种实蝇的HRM特异性引物，分别提取瓜实蝇和南亚果实蝇基因组DNA，然后以提取的DNA为模板，EvGreen为染料进行高分辨率实时荧光定量PCR分析，根据熔解温度曲线峰值差异区分两种实蝇种类。本发明解决了两种共寄主发生且幼虫相似的瓜实蝇和南亚果实蝇快速鉴定的问题，建立了基于线粒体基因鉴别两种实蝇的HRM方法。本发明可快速、高效、简捷区分在瓜类蔬菜上混合发生的瓜实蝇和南亚果实蝇，准确性高，能实现高通量，重复性好且成本低廉。
主权项：1.一种快速鉴别瓜实蝇和南亚果实蝇的方法，其特征在于，包括以下步骤：以引物F：CCTGGTCCTTTCGTACTAAGGTATT和引物R：TGATCTGAGTTCAGACCGGC作为引物，以提取的待测样品的单头虫子DNA作为模板，添加荧光饱和染料，进行RT-PCR扩增反应，并设置瓜实蝇、南亚果实蝇阳性对照；对扩增产物进行HRM分析，确定待测样品类型；所述的RT-PCR扩增反应，其反应体系为：引物F和R各0.2μM，2XEvGreen染料1μl，5Uμl的ExTaqHSDNA聚合酶0.1μl，20mMMg2+plus的10XExTaqBuffer2μl，2.5mM的dNTPMixture1.6μl，模板DNA100ng，无菌水补足至20μl；反应程序为：95℃预变性30s；95℃10s、62℃30s，40个循环；所述的HRM分析，是70℃-95℃、以0.1℃步的升温速率、每0.05s收集一次荧光进行溶解曲线分析；所述的确定待测样品类型的分析过程为：若待测样品与瓜实蝇阳性对照溶解曲线聚类拟合，则该样品为瓜实蝇；若待测样品与南亚果实蝇阳性对照溶解曲线聚类拟合，则该样品为南亚果实蝇。
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权利要求：
百度查询： 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 快速鉴别瓜实蝇和南亚果实蝇的HRM引物、试剂盒及方法
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