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申请/专利权人：复旦大学附属肿瘤医院

摘要：本发明提供的一种血浆游离RNA中BOLA3的3号外显子表达比例的测试方法，包括BOLA3基因的两对引物，本发明公开一种血浆游离RNA中BOLA3的3号外显子表达比例的测试方法，利用外显子跳跃理论，设置一对引物即可检测两个条带，减少了检测过程中的变量，稳定性好；且利用两对引物的设置，能够相互验证，确保了实验结果的可靠性；本申请通过影像扫描以及ImageJ进行两条带的灰度值分析，获得BOLA3的3号外显子表达比例，摆脱了常规PCR实验需要设置内参可能带来的影响。而且本申请的无创检测方法具有普筛的潜力，为常规PCR检测，操作简单方便，为胃癌的早期诊断提供了新的方向。

主权项：1.一种血浆游离RNA中BOLA3的3号外显子表达比例的测试方法，其特征在于，包括BOLA3基因的两对引物，其碱基序列为：BOLA3-P1Forward：CCACGAGCTACAGCTATAAAAGTCBOLA3-P1Reverse：CAGAGGTAAATATCCGCAATCCBOLA3-P2Forward：CCACGAGCTACAGCTATAAAAGTCBOLA3-P2Reverse：CGTTTGGGGACAGAGGTAABOLA3的3号外显子表达比例的测试方法包括以下步骤：1试剂耗材准备根据实际使用要求准备采血管、血清血浆游离RNA提取试剂盒、逆转录试剂盒、移液器、无酶无菌枪头1mL、200uL、10uL、无酶无菌PCR管、2×TaqPCRMasterMix以及DNA染料；并配置RNA酶抑制剂预混液；2血液采集与保存将步骤1的RNA酶抑制剂预混液加入到采血管中，而后采集早餐前的外周血1-2mL，并将采集好血液的采血管放置在4℃冰箱保存或者冰上保存待用；3血浆RNA提取将离心管至于低温离心机内，3000rpm，离心10分钟，抽取200uL步骤2的血浆置于1.5mL的EP管内，放置冰上备用；而后使用血清血浆游离RNA提取试剂盒进行血浆RNA提取；并将提取好的RNA利用NanoDrop2000进行浓度检测；4逆转录的进行配置PCR反应液，进行逆转录；5检测与分析将步骤4的反应液进行配置，置于水平电泳仪上进行测试，45分钟后置于显影仪上进行显影，并对两条灰度值分析，最后计算上条带下条带的比值，得到血浆游离RNA中BOLA3的3号外显子表达比例。

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