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申请/专利权人：东北林业大学

摘要：本发明公开了一种盐单胞菌Halomonassp.ZY‑1在开放不灭菌条件下，利用秸秆与地沟油合成生物可降解地膜的方法。秸秆经处理得到秸秆上清液，配制秸杆上清液与地沟油体积比为35:1‑40:1的MS培养基。在序批式反应器SBR内Halomonassp.ZY‑1利用不灭菌的秸杆上清液与地沟油MS培养基好氧培养获得菌体，提取胞内聚酯类物质。将聚酯类物质进一步改性获得拉伸强度16‑18MPa的地膜，将地膜深埋20‑30cm耕地土壤中，35d减重率40％‑50％，而置于干燥空气中35d减重率0.3％‑0.5％。以嗜盐菌不灭菌条件下利用废弃物合成生物地膜最大限度降低生产成本，亦为实现绿色生态循环、农业可持续发展提供技术支持。

主权项：1.一种盐单胞菌Halomonassp.ZY-1在开放、不灭菌条件下利用秸秆和地沟油合成生物可降解地膜的方法，其特征是，生物可降解地膜的合成步骤如下：步骤1：将秸秆粉碎过100-200目细筛获得秸秆粉，每1L的1-2molLNaOH溶液浸泡75-140g秸秆粉，高温高压处理2-4h，4000-6000rmin离心10min收集秸秆上清液，上清液成分为纤维素2.5-6%、木糖15-30%、木质素16-25%、酸溶木质素1-5%；上清液添加地沟油使得秸秆上清液与地沟油体积比为35-40:1，配制MS培养基；步骤2：在序批式反应器（SBR）中配制秸秆上清液和地沟油为碳源的MS培养基，直接取1-5%盐单胞菌Halomonassp.ZY-1种子液，接种于SBR反应器含秸秆上清液和地沟油为碳源不灭菌的MS培养基中，搅拌器转速为200-240rmin，25-30℃，溶解氧大于2mgL供氧12h周期，每天2周期，连续培养100-140h收集发酵液；所述盐单胞菌Halomonassp.ZY-1与Halomonas.elongata相似度为99%，Genebank登录号为MH428215，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，于2018年11月22日保藏，编号为CGMCCNo.16773；步骤3：采用氯仿-次氯酸钠法破壁提取胞内聚酯类物质：1将发酵液离心收集菌体，置于-20℃预冷12-14h，在冻干机内冻干12-24h，依次经蒸馏水洗、4000-6000rmin离心10min、丙酮洗、离心、再水洗和离心；2将菌体放入锥形瓶中，加入氯仿：次氯酸钠为3:1vv的混合溶液，混匀后4000-6000rmin离心10min，吸取下层氯仿相平铺于洁净的容器中，加入预冷的95%乙醇10-15mL析出聚酯类物质，将聚酯类物质、聚己二酸对苯二甲酸丁二酯、碳酸钙、二氧化钛按一定质量比混匀后熔融，挤粒吹塑成生物可降解地膜；步骤4：经材料学性质分析，地膜具有生物可降解性、韧性、透明度，能够作为合成农用地膜的材料；步骤1中所述地沟油，其特征是，成分为90-92%油酸、3-4%甘油三酯、2-3%植物油、2-3%动物油；步骤1中所述秸秆上清液和地沟油为碳源的MS培养基，其特征是，秸秆上清液750-800mLL、地沟油17-20mLL、酵母浸提物5-10gL、Na2HPO4•12H2O10-15gL、KH2PO41-2gL、NH4Cl1-2gL、MgSO40.1-1.5gL、FeIII-NH4-Citrate0.05-0.1gL、CaCl2•2H2O0.02-0.1gL、ZnSO4•7H2O0.1-0.5gL、NaCI60-70gL，pH调至9.5-11，不灭菌直接用于培养盐单胞菌（Halomonassp.）ZY-1；步骤2中所述SBR，其特征是，SBR反应器的主罐体为玻璃，滗水器、电磁阀运行所需的零件均为耐酸碱的304钢，反应器总容积为15L，有效容积13L，每周期进水10L，排水比1013。

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百度查询： 东北林业大学 盐单胞菌Halomonas sp ZY-1利用秸秆和地沟油廉价合成生物可降解地膜