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申请/专利权人:云南林业职业技术学院;云南植虫药生物科技有限公司
摘要:本发明涉及植物组培技术领域,具体来说是一种北美红杉组培快繁方法及应用;步骤包括:外植体消毒:选择端部未木质化的幼嫩枝条,利用酒精、双氧水、升汞消毒;初代丛生芽诱导:消毒外植体接种于初代丛生芽诱导培养基中培养;继代丛生芽增殖:初代诱导丛生芽切成单芽,接种于丛生芽增殖培养基培养;丛生芽生根:继代丛生芽切成单芽,接种于生根培养基培养;本发明在无菌体系建立过程中,较现有技术消毒效果佳,主要表现为在对损伤外植体极小损伤的前提下,有效降低了污染率,其主要是通过采用常规的酒精和升汞的同时,在中间环节添加一定浓度的双氧水进行消毒,同时配合降低升汞浓度以及采用适宜的升汞消毒时间的方式。
主权项:1.北美红杉组培快繁方法,其特征是,步骤包括:(1)外植体消毒:选择端部未木质化的幼嫩枝条,利用75%酒精消毒50~60s,无菌水涮洗2~3次;利用0.2%双氧水在60rmin常温摇床上消毒4~6h,无菌水涮洗2~3次;利用0.05%升汞消毒12~15min,无菌水涮洗6~7次;(2)初代丛生芽诱导:消毒的外植体接种于初代丛生芽诱导培养基中,置于温度25±2℃,每日照光12h,光强2000~3000lx的光暗交替下培养40~45天;所述初代丛生芽诱导培养基配方为:WPM+NAA0.1~0.2mgL+ZT2.0~3.0mgL+TDZ0.5~1.0mgL+活性炭0.3~0.5gL;(3)继代丛生芽增殖:初代诱导丛生芽切成单芽,接种于丛生芽增殖培养基中,置于温度25±2℃,每日照光12h,光强2000~3000lx的光暗交替下培养30~35天;所述继代丛生芽增殖培养基配方为:WPM+NAA0.02~0.05mgL+ZT0.5~1.0mgL+TDZ0.3~0.5mgL+BR0.02~0.03mgL+椰汁20~30mlL;(4)丛生芽生根:继代丛生芽切成单芽,接种于生根培养基中,置于温度25±2℃,每日照光14h,光强2000~3000lx的光暗交替下培养20~25天;所述生根培养基配方为:12WPM+NAA0.2~0.3mgL+IBA1.0~1.2mgL+椰汁50~60mlL。
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