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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明公开了一种基于DON控制的双色复合探针对DON和miR‑34a同时细胞成像的方法，可用于可视化评估DON毒性，属于荧光成像和生物传感技术领域。本发明利用EDCNHS介导的酰胺反应将红色发光的R‑AuNCs和绿色发光的G‑AuNCs分别与氨基功能化的发卡结构H1和H2偶联，MoS2纳米片既作为荧光淬灭剂，也作为将核酸递送进入细胞的载体；在细胞内，DON与适配体的结合，DON刺激产生的miR‑34a会与H1*的足点序列结合，最终导致荧光恢复，从而实现对DON和miR‑34a同时细胞成像。

主权项：1.一种制备双色金纳米簇复合探针的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）双色金纳米簇的制备分别制备第一色荧光金纳米簇、第二色荧光金纳米簇；第一色、第二色分属不同的颜色；所述第一色荧光金纳米簇是红色荧光金纳米簇，制备方法如下：红色荧光金纳米簇的制备：将牛血清白蛋白分散于超纯水，之后向上述溶液中加入HAuCl4溶液，搅拌，然后缓慢加入碱溶液，调节得到pH值为9-12的混合溶液，孵育；之后，利用透析袋对金纳米簇进行纯化，以去除未反应的杂质，得到红色荧光金纳米簇溶液，低温避光保存；所述第二色荧光金纳米簇是绿色荧光金纳米簇，制备方法如下：绿色荧光金纳米簇的制备：将6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶分散于碱溶液中，待6-氮杂-2-硫代胸腺嘧啶彻底溶解后，加入到HAuCl4溶液中，混合均匀，得到混合溶液，于室温避光搅拌得到金纳米簇；利用超滤管对金纳米簇进行纯化，以去除未反应的杂质，得到绿色荧光金纳米簇溶液，低温避光保存；（2）双色金纳米簇与DNA的偶联首先，吸取H1*和DON适配体，加入缓冲液，混合均匀后加热并冷却至室温以形成发卡结构H1；同时，吸取H2，加入缓冲液，混合均匀后加热并冷却至室温以形成发卡结构H2；H1*的序列为TGTCTTAGCTGGTTGTCAAAGTACAACCAGCTAAGACACTGCCACTTCACACGATAC；H2的序列为NH2-ACTTTGACAACCAGCTAAGACATGGCAGTGTCTTAGCTGGTTGT；DON适配体的序列为NH2-GCATCACTACAGTCATTACGCATCGTAGGGGGGATCGTTAAGGAAGTGCCCGGAGGCGGTATCGTGTGAAGTGCT；之后，将缓冲液分别与第一色荧光金纳米簇和第二色荧光金纳米簇混合均匀后，分别加入EDCNHS，第一次孵育以活化金纳米簇表面的羧基；之后，分别加入发卡结构H1和发卡结构H2，混合均匀后第二次孵育；第二次孵育完成后，去除未反应的H1和H2，分别得到第一色-AuNCs-H1溶液和第二色-AuNCs-H2溶液，低温避光保存；（3）双色金纳米簇复合探针的制备分别吸取第一色-AuNCs-H1溶液和第二色-AuNCs-H2溶液，混合得到混合溶液，加入RNase抑制剂，然后加入MoS2溶液，室温振荡孵育，得到双色金纳米簇复合探针溶液。

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