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一种基于qPCR扩增曲线曲率变化提取Cq值的方法及测量仪 

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申请/专利权人:迈迪云享数据科技(苏州)有限公司

摘要:一种基于qPCR扩增曲线曲率变化提取Cq值的方法,步骤包括:使用改良的均值滤波法对qPCR实测数据滤波;利用改进最小二乘法的Pratt圆拟合算法和直线拟合算法分别对以n个点为一组的滤波后数据进行拟合,对两者结果进行均方根误差RMSE、标准偏差SD等指标计算,分析比较指标选取效果更好的方法为该组数据更适合的拟合算法,获得第一Cq值;对滤波后的数据进行四参数模型拟合,计算获取曲线的四参数的预估值,计算曲线梯度变化,根据斜率预估值和梯度值确定第二Cq值;根据拟合结果对曲线分类,确定分类权重,计算获得最终Cq值,还公开了一种应用上述检测方法进行Cq检测的qPCR测量仪,本发明能更加准确地判断曲线类型,能筛选出理想型扩增曲线并获得准确的Cq值。

主权项:1.一种基于qPCR扩增曲线曲率变化提取Cq值的方法,其特征在于,所述方法步骤包括:S1,扩增曲线预处理:使用改良的均值滤波法对qPCR实测数据进行滤波,获得滤波后的数据;S2,第一Cq值的获取:利用改进最小二乘法的Pratt圆拟合算法和直线拟合算法分别对以n个点为一组的滤波后的数据进行拟合,再对两者结果进行均方根误差RMSE、标准偏差SD等指标计算,通过分析比较指标选取效果更好的方法为该组数据更适合的拟合算法,获得第一Cq值,其中n为正整数;S3,第二Cq值的获取:对滤波后的数据进行四参数模型拟合,计算获取曲线的四参数的预估值,所述四参数包括拟合最大值、最小值、斜率和中心位置,再计算曲线的梯度变化,根据斜率预估值和梯度值确定第二Cq值;S4,根据拟合结果,对曲线进行分类,经滤波、拟合后的曲线分为四种:理想型、噪音污染型、拟是扩增型和非扩增型;确定对应的分类权重,计算获得最终Cq值。

全文数据:

权利要求:

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