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申请/专利权人：广西科学院
摘要：本发明公开了一种含有打靶目标位点的CRISPRCas9系统、其快速构建的方法及应用，包括以下步骤：S1，tracrRNA和crRNA设计成单个嵌合体gRNA，获得gRNA骨架；S2，所述gRNA骨架、第二Cas9蛋白和表达元件组装成CRISPRCas9系统的质粒；S3，增殖并提取质粒；S4，内切酶对S3中所述质粒的内切酶识别位点进行酶切，获得含有Cas9的大片段，其中，所述内切酶为IIS型限制性内切酶或同裂酶；S5，根据编辑位点设计能与gRNA骨架连接的片段，获得gRNA；S6，将所述含有Cas9的大片段与gRNA连接，获得含有打靶目标位点的CRISPRCas9系统。本发明方法获得含有打靶目标位点的CRISPRCas9系统，更方便、快速地获得编辑一个或多个位点的CRISPRCas9系统，用该系统可以快速对野生型工业酿酒酵母的一个位点或多个位点进行编辑。
主权项：1.一种快速构建含有打靶目标位点的CRISPRCas9系统的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1，tracrRNA和crRNA设计成单个嵌合体gRNA，获得gRNA骨架；S2，所述gRNA骨架、第二Cas9蛋白和表达元件组装成含有CRISPRCas9系统的质粒；S3，增殖并提取质粒；S4，内切酶对S3中所述质粒的内切酶识别位点进行酶切，获得含有Cas9的大片段，其中，所述内切酶为IIS型限制性内切酶或同裂酶；S5，根据编辑位点设计能与所述gRNA骨架连接的片段，获得gRNA；S6，将所述含有Cas9的大片段与gRNA连接，获得含有打靶目标位点的CRISPRCas9系统。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广西科学院 一种含有打靶目标位点的CRISPR/Cas9系统、其快速构建的方法及应用
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