买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：江苏大学

摘要：本发明属于生物传感检测领域，涉及一种检测Pb2+的羧基配体诱导的湮灭型比率电化学发光适配体传感方法。本发明以具有强阴‑阳极信号强度的羧基三联吡啶钌作为发光体，利用Pb2+适配体和其互补DNA的杂交作用以固定羧基三联吡啶钌的共振能量转移受体金纳米粒子，开发了一种检测Pb2+的湮灭型比率电化学发光适配体检测方法，因为结合具有优异湮灭性能的羧基三联吡啶钌和其在阴阳极可区分的共振能量转移受体金纳米粒子，提高了湮灭型比率电化学发光法的可靠性；因为引入特异性识别元件Pb2+的适配体，提高了电化学发光法的选择性，实现对Pb2+的特异性分析；该方法灵敏度高，选择性好，且可靠性高。

主权项：1.一种检测Pb2+的羧基配体诱导的湮灭型比率电化学发光适配体传感方法，其特征在于，步骤如下：（1）AuNPs和AuNPs-cDNA的制备；将HAuCl4·3H2O溶液溶于超纯水中，搅拌溶解得到混合溶液；然后将混合溶液在150℃温度下加热至沸腾后，加入浓度为100mg·mL-1的柠檬酸钠溶液，得到红色溶液；随后，静置反应15~20min后冷却至室温，得到AuNPs溶液；所述HAuCl4·3H2O溶液的浓度为0.1M；所述HAuCl4·3H2O溶液、超纯水和柠檬酸钠溶液的体积比0.2：25：0.25；制备AuNPs-cDNA的过程中，首先，将末端带有巯基的cDNA溶液和三（2-羰基乙基）磷盐酸盐溶液混合，静置1h，得到活化的cDNA溶液；之后，将活化的cDNA溶液和AuNPs溶液混合，摇晃孵育，孵育后离心收集上清液，即为AuNPs-cDNA溶液；所述末端带有巯基的cDNA溶液的浓度为100μM；所述三（2-羰基乙基）磷盐酸盐溶液的浓度为10mM；所述末端带有巯基的cDNA与三（2-羰基乙基）磷盐酸盐溶液的体积比为0.5:1；所述的活化的cDNA溶液与AuNPs溶液的体积比为150μL：1850μL；所述摇晃孵育时间为12h；（2）将玻碳电极依次用不同粒径的三氧化二铝粉末打磨，然后依次在乙醇和水中超声，最后在空气中干燥得到预处理后的电极；（3）将步骤（2）预处理后的电极浸泡在HAuCl4·3H2O溶液中电沉积金粒子，电沉积处理后得到电沉积电极；（4）在步骤（3）制备的电沉积电极上修饰Pb2+适配体溶液，在4℃温度条件下继续反应12h，得到适配体电极；所述Pb2+适配体溶液的浓度为0.8μM，在电极上修饰的用量为6μL；（5）在步骤（4）制备的适配体电极上滴加巯基己醇溶液，室温条件下进行孵育，得到孵育后的电极；所述巯基己醇溶液的浓度为1mM；在电极上滴加的用量为6μL；所述孵育的时间为1h；（6）在步骤（5）孵育后的电极上滴加步骤（1）制备的AuNPs-cDNA溶液；在37℃温度条件下反应2h，反应后得到传感器，记为AuNPs-cDNAMCHAptAuPsGCE；所述AuNPs-cDNA溶液的浓度为0.2~5.2nM；滴加用量为6μL；（7）将步骤（6）得到的传感器置于不同浓度Pb2+标准溶液中绑定40min，一个浓度的Pb2+标准溶液对应一个传感器，浓度和传感器呈一一对应关系；经超纯水冲洗后在室温下自然晾干；此时制得的电极记为Pb2+AuNPs-cDNAMCHAptAuPsGCE-1；以其作为工作电极，饱和AgAgCl电极为参比电极，铂丝电极为对电极；将所述的三电极体系在含有羧基三联吡啶钌的缓冲溶液中进行测试，检测电化学发光信号；由MPI-EII电化学发光分析仪记录和检测电化学发光信号；通过监测羧基三联吡啶钌的阴极和阳极ECL信号比的变化，建立Pb2+溶液浓度和电化学发光信号的对应关系的标准线性曲线；所述Pb2+溶液的浓度为1.0´10-12~3.0´10-8M；所述缓冲溶液为磷酸缓冲液，浓度为0.1M，pH值为7.5；所述的羧基三联吡啶钌为三（2,2'-联吡啶基）二氯钌（II）六水合物、双（2,2'-联吡啶基）（4-羧基-2,2'-联吡啶基）二氯化钌（II）或三（4,4'-二羧酸-2,2'-联吡啶基）二氯化钌（II）中的一种，所述的羧基三联吡啶钌在缓冲溶液中的浓度为0.5mM；所述测试时所采用的参数为：电压为-1.8V~+1.35V，扫描速率为0.1Vs，光电倍增管高压为700V；（8）待测样品中Pb2+浓度的检测：将步骤（6）得到的传感器置于Pb2+的待测溶液中绑定40min，超纯水冲洗后在室温下自然晾干，晾干后记为Pb2+AuNPs-cDNAMCHAptAuPsGCE-2；然后以Pb2+AuNPs-cDNAMCHAptAuPsGCE-2作为工作电极，饱和AgAgCl电极为参比电极，铂丝电极为对电极；将所述的三电极体系在含有羧基三联吡啶钌的缓冲溶液中进行测试，检测电化学发光信号；将监测到的羧基三联吡啶钌的I阴I阳的变化代入步骤（7）建立的标准线性曲线中，得到待测溶液中Pb2+的浓度，实现对Pb2+的高灵敏检测；所述的羧基三联吡啶钌在缓冲溶液中的浓度为0.5mM；所述测试时所采用的参数为：电压为-1.8V~+1.35V，扫描速率为0.1Vs，光电倍增管高压为700V。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏大学 一种检测Pb²⁺的羧基配体诱导的湮灭型比率电化学发光适配体传感方法