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申请/专利权人：苏州飞康生物医药有限公司

摘要：本发明提供了一种人头发皮质醇的提取和检测方法，所述方法包括：头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果。本申请明确定量化了人类头发皮质醇头发样本的收集流程，对皮质醇抽提的得率显著提高；优化了头发洗涤后干燥的工序，干燥简单、迅速。

主权项：1.一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，所述方法包括：（1）头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；（2）头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；（3）头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；（4）头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；（5）皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；（6）干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；（7）皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果；其中，所述步骤（2）具体为：将所述头发置于2-4ml的异丙醇中进行振荡洗涤2-3次，振荡频率为200-300转分钟，每次3分钟；之后取出头发，在干净无污染的吸水纸上除去多余的溶剂，将其剪短后置于离心管中用吹扫仪接压缩空气，室温下吹干干燥即可；其中，所述步骤（3）具体为：取洗涤干燥完的头发放入球磨仪，选用不锈钢或氧化锆研磨球，研磨时长为1分钟，转速7000转分钟，即可迅速完成研磨过程，可获得5微米粒径的头发粉末；其中，在研磨前，将头发放入冰箱进行预冻，保证研磨过程中样品处于冷却状态；其中，所述步骤（5）具体包括如下步骤：5.1按照1-2ml10mg的量向头发粉末中加入乙醇，在52°C条件下，利用倾斜旋转混合仪以80转分钟的转速孵育15小时，收集上清液，并保留得到组分1；5.2按照1-2ml10mg的量向剩余液中加入丙酮，在室温条件下，利用倾斜旋转混合仪以80转分钟的转速孵育15分钟，收集上清液，并保留得到组分2；5.3重复步骤5.1，收集上清液，并保留得到组分3；5.4合并组分1、2和3，得到皮质醇抽提液；其中，所述步骤（6）具体包括如下步骤：6.1将皮质醇抽提液置于玻璃试管内，用压缩氮气完全吹干；6.2向玻璃试管内加入100-300微升的0.1molL的PBS缓冲液，PBS缓冲液pH值7.4，在PBS缓冲液中加入0.1%重量比BSA和0.01%体积比的tritonX-100，振荡充分溶解其中的皮质醇，得到皮质醇待测物；其中，吹干过程中保证氮气吹管之间的相互独立，以免引起样品之间的交叉污染；其中，所述步骤（7）中利用唾液皮质醇酶联免疫法试剂盒对皮质醇待测物进行测定。

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