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摘要:本发明提供了一种小茴紫朵丽蝶的组织培养快速繁殖方法,包括外植体的制备与消毒→启动培养→不定芽诱导培养→不定芽的增殖培养→生根培养→组培苗移栽。本发明首次采用组织培养的方法对小茴紫朵丽蝶进行繁殖,该方法繁殖更快,可达到规模化生产的要求,保证了种苗的品质和质量,为小茴紫朵丽蝶繁殖提供了新的有效途径。本发明在诱导培养步骤中通过诱导原球体,用原球体进行增殖长出多芽体,增殖系数2.0‑3.0,与一般分株繁殖方法相比,大大提高了繁体系数。本发明在不定芽诱导培养、不定芽的增殖培养步骤中,培养环境为温度25‑28℃,光照时长8‑11小时,光照强度2000‑3000lux。
主权项:1.一种小茴紫朵丽蝶的组织培养快速繁殖方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)外植体的制备与消毒:挑选生长健壮、无病虫害长势良好的3.5寸小茴紫朵丽蝶苗,待抽花梗并生长至10-15cm时取做外植体,用75%酒精擦拭花梗,将花梗切成2-3cm带节芽的节段,把节芽苞片切除备用;1wt%的双氧水中加2滴吐温,置于摇床上振荡2个小时后,用无菌水洗涤2次,用75%酒精漂洗1分钟,无菌水漂洗2次,将芽段按大中小分组进行消毒;用0.1-0.2wt%二氧化氯水溶液在摇床上进行消毒灭菌,大、中、小芽段的二氧化氯水溶液消毒时间分别为18-25min、12-17min、10-12min,节段消毒灭菌结束后用无菌水漂洗2-3遍待转入培养基;(2)启动培养:取步骤1中消毒好的节段,切去两端0.5cm,将节芽朝上插入启动培养基中进行培养,培养环境温度26-30℃,光照时长8-11小时,光照强度2000-3000lux;培养60-80天,节芽生长成有2-3片叶片的小苗后转接到增殖培养基;(3)诱导培养:从步骤2中培养的花梗上切离小苗,将小苗的茎段横切成0.5cm的片段,平放在诱导培养基上,培养环境温度25-28℃,光照时长8-11小时,光照强度2000-3000lux,培养50-60天,在茎段切片上可长出原球体;(4)增殖培养:从步骤3中的组织片段上切离原球体,接种到增殖培养基上进行增殖扩繁,培养环境温度25-28℃,光照时长8-11小时,光照强度2000-3000lux,培养50-60天,可获得多量的原球体或从原球体上获得多量的不定芽;(5)壮苗生根培养:从步骤4获得的不定芽组织上切离小苗,接种到壮苗生根培养基上,培养环境温度26-30℃,光照时长10-12小时,光照强度3000-4000lux,培养50-60天,小苗生长到3-4片叶,再次接种到壮苗生根培养基,培养环境温度26-30℃,光照时长10-12小时,光照强度3000-4000lux,培养50-60天,小苗生长到4-5片叶,长出2-3cm的根后出瓶定植;(6)组培苗移栽:将步骤4中的小苗从培养瓶中取出,用干净的水将培养基洗掉,转移至水帘大棚,用5.5cm透明软杯种植,用40cm*60cm*45孔穴盆固定摆放;栽培后将小苗叶片按穴盆对角线平行摆放;定植7天后淋一次4000倍克土菌,种植环境湿度80-95%,温度26-30℃,种植的基质为水草;等长出根系后,开始淋肥水。
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