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申请/专利权人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所

摘要：本发明公开了一种基于氨基酸突变策略构建的具有超强α‑糖苷酶抑制活性的新型白果源五肽，所述的超强抑制α‑葡萄糖苷酶的活性五肽是在前期从银杏白果（GinkgobilobaL.）获得FAPSW（Phe‑Ala‑Pro‑Ser‑Trp）白果五肽基础上，经N端的氨基酸突变构建了新型五肽YAPSW（Tyr‑Ala‑Pro‑Ser‑Trp），其α‑糖苷酶抑制活性（IC50=126μM），显著高于阳性对照阿卡波糖（IC50=294μM），以及母体FAPSW的活性（IC50=445μM）。本申请发明的新型白果源五肽能够强效抑制α‑葡萄糖苷酶活性，可作为功能活性成分应用于食品、保健品以及降糖药品中，具有良好的应用前景。

主权项：1.一种基于氨基酸突变策略构建的具有超强α-糖苷酶抑制活性的新型白果源五肽，其特征在于，所述的具有超强抑制α-葡萄糖苷酶的新型白果源五肽由下述方法筛选得到：（1）基于与α-葡萄糖苷酶多肽之间形成氢键的策略构建位于多肽N端的Serine（S）、Threonine（T）、Tyrosine（Y）、Lysine（K）、Arginine（R）和或位于C端的Methionine（M）、Alanine（A）等氨基酸残基更倾向于与α-葡萄糖苷酶形成氢键，能够提高多肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性；（2）固相合成活性多肽参考母体FAPSW的氨基酸序列，采用叔丁氧羰基（Boc）作为氨基酸N端的保护基，再通过串联反应的方式将氨基酸逐一加入到多肽链中，然后通过去保护等一系列步骤完成合成系列多肽（YAPSA、RAPSA、KAPSA、SAPSA、VAPSM、VAPSW、FAPSA、TAPSA、TAPSW、FAPSM、VAPSA、YAPSW、KAPSW、RAPSM、SAPSW、KAPSM、SAPSM、TAPSM、RAPSW、YAPSM、FAPSW）；（3）白果多肽的序列结构解析采用ABEksigentEkspert™纳升液相色谱（LC425）联用SciexTripleTOF™5600plus质谱测定上述多肽的氨基酸序列。液相色谱条件：色谱柱：3C18-CL-120色谱柱（0.3×150mm,3μm）。流动相A为2%乙腈水溶液（含0.1%甲酸，vv），流动相B为98%乙腈水溶液（含0.1%甲酸，vv）。梯度洗脱程序为：0-1min，95%A-92%A；1-51min，92%A-62%A；51-52min,62%A-20%A。流速为0.30μLmin。质谱条件：扫描模式为正离子模式。一级质谱扫描范围为350~1250mz，二级质谱扫描范围为100~1500mz。其他质谱检测器参数设置如下：气帘气：30psi，30Lmin；离子喷雾电压：2.3kv；去簇电压为80eV，CE和CES分别为40eV和5eV；（4）活性多肽的筛选及突变构建使用PeptideRankerweb服务器（http:distilldeep.ucd.iePeptideRanker）对上述ALC≥99%的多肽进行进一步筛选，评分大于0.50的多肽视为生物活性肽，选取这些潜在生物活性多肽进行下一步接分析；（5）α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的筛选通过Pymol（教育版）生成多肽的三维结构，并使用LigPrep模块中的OPLS4力场对其结构进行优化。α-葡萄糖苷酶晶体结构（PDBID:3wy1）从RCSB蛋白数据库https:www.rcsb.orgstructure3WY1下载，并通过Maestro（Schrödinger）软件中的ProteinPreparationWizard模块对蛋白结构进行去水、加氢以及补充缺失的原子，并利用OPLS4力场对其进行能量最小化处理。以原始配体位置附近定义结合位点，并使用额外精度（XP）对接模式（Glide程序）对蛋白和多肽进行对接。

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百度查询： 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 一种基于氨基酸突变策略构建的具有超强α-糖苷酶抑制活性的新型白果源五肽