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摘要:本发明公开一种用于检测鰤鱼诺卡氏菌的RPA组合物、荧光RPA试剂盒及检测方法,属于生物技术领域。该用于检测鰤鱼诺卡氏菌的RPA组合物,包括上游引物、下游引物和探针。此外,本发明提出一种用于检测鰤鱼诺卡氏菌的荧光RPA试剂盒,包括上述RPA组合物。本发明还提出一种鰤鱼诺卡氏菌的检测方法,包括以下步骤:S1、提取待测样品DNA;S2、以步骤S1所提取的DNA为扩增模板,采用上述RPA组合物避光进行RPA扩增反应,并在扩增反应期间收集多次荧光信号,采集荧光数据,如果获得扩增曲线,则判定为阳性,反之,无扩增曲线则判定为阴性。该RPA组合物能快速、简便、特异的检测鰤鱼诺卡氏菌。
主权项:1.一种用于检测鰤鱼诺卡氏菌的RPA组合物,其特征在于,包括上游引物、下游引物和探针;所述上游引物和所述下游引物的寡核苷酸序列分别如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示;所述上游引物:5’-GTAGTCCGGCGGACGCTCATGGGTGGAACACTGAC-3’;所述下游引物:5’-CAAAGATGCTCGCGTCCACTGTGCAGTTCTC-3’;所述探针的寡核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,且探针序列中具有荧光基团FAM和猝灭基团BHQ1,两个基团之间由四氢呋喃隔开,3’端由C3Spacer修饰;所述探针:5’-CACTGACAACCTTCATCGCACTCGATCGGTACFAM-dTCTHFGBHQ1-dTGACCGGTCGCGGTGGAC3Spacer-3’;针对鰤鱼诺卡氏菌转录间隔区的保守区域设计引物和探针,所述鰤鱼诺卡氏菌转录间隔区的特异性保守序列如SEQIDNO.8所示。
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百度查询: 华中农业大学 用于检测鰤鱼诺卡氏菌的RPA组合物、荧光RPA试剂盒及检测方法
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