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细胞原位交联与亲和纯化质谱结合的蛋白组学方法 

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申请/专利权人:中国科学院大连化学物理研究所

摘要:本发明涉及一个细胞原位蛋白‑蛋白相互作用网络靶向富集的分析方法,选取生物素标记带有赖氨酸的靶蛋白的细胞,将细胞加入化学可断交联剂溶液中,进行活细胞原位交联,细胞裂解后采用链合亲霉素磁珠材料富集,通过链霉亲和素和靶蛋白上的生物素特异性结合来富集靶蛋白以及其连接的蛋白,在洗去非特异性吸附蛋白后,使用三2‑羧乙基膦TCEP和2‑氯乙酰氨CAA联合反应将交联剂断开,然后在链合亲霉素磁珠材料上进行蛋白酶酶解,最后质谱检测脱盐后的酶解肽段,得到靶蛋白相互作用复合物的信息。该方法的创新性在于将亲和纯化质谱与交联方法结合,提高了传统亲和纯化方法的覆盖度,同时不受交联数据解析难的影响。

主权项:1.细胞原位交联与亲和纯化质谱结合的蛋白组学方法,其特征在于:选取生物素标记带有赖氨酸的靶蛋白的细胞,收集细胞后,将细胞加入化学可断交联剂DSEP溶液中,进行活细胞原位交联,使靶蛋白及其周围的带有赖氨酸的蛋白分子通过交联剂连接起来交联剂两端都可以和蛋白序列中的赖氨酸发生反应,细胞裂解后采用链合亲霉素Streptavidin磁珠材料富集,通过链霉亲和素和靶蛋白上的生物素特异性结合来富集靶蛋白以及其连接的蛋白,在洗去非特异性吸附蛋白后,使用三2-羧乙基膦TCEP和2-氯乙酰氨CAA联合反应将交联剂断开,然后在链合亲霉素Streptavidin磁珠材料上进行胰蛋白酶酶解,最后质谱检测脱盐后的酶解肽段,得到靶蛋白相互作用复合物的信息。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国科学院大连化学物理研究所 细胞原位交联与亲和纯化质谱结合的蛋白组学方法

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