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申请/专利权人：山东滨州沃华生物工程有限公司
摘要：本发明提供了一种肿头综合症发病鸡眶下窦中不同种类细菌的鉴定方法，属于细菌鉴定技术领域。本发明通过提取肿头综合征发病鸡眶下窦拭子DNA，扩增16SrRNAV3‑V4区并测序，对序列进行详细的分析，从而鉴定出引起肿头综合征的各种致病菌，并对各种致病菌进行分离鉴定。后期通过对各种致病菌回归动物实验，判断出各种细菌引起的临床症状，有利于解决鸡养殖过程中肿头综合征难题。与传统的PCR检测方法对比，16SrRNA测序法还可以得出不同细菌在组织中的丰度，还可检测出PCR阴性菌，避免漏测等现象，避免因检测问题造成的误诊，对鸡健康养殖及防治潜在疾病起到积极的指导作用，有利于新病原的发现，促进疫苗的开发。
主权项：1.一种肿头综合症发病鸡眶下窦中不同种类细菌的鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：1无菌条件下通过眶下窦拭子分离纯化微生物DNA，扩增常规引起鸡肿头综合征的细菌并进行PCR鉴定；2以步骤1纯化的DNA为模板，用带有barcode的特异性引物对16SrRNA的V3-V4区域进行一轮扩增，得到的产物进行纯化、定量；定量后进行二轮扩增、纯化、定量、测序；3将步骤2二轮扩增产物等摩尔定量后的产物在Illumina平台上进行末端配对测序；对测序片段进行数据分析，对相似度≥97％的片段进行聚类分析，获得OTU，后将OTU序列分类到生物体中，统计OTU序列分类结果后根据统计结果进行物种组成分析、指示物种分析、α多样性分析和β多样性分析，确定肿头综合征发病鸡与对照鸡组别之间的细菌种之间差异；4分析测序注释阳性细菌种类和PCR结果之间的差异性5对步骤3得到的OTU进行功能分析；6利用检测结果高灵敏度指导养殖鸡场对于鸡的免疫与防治。
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百度查询： 山东滨州沃华生物工程有限公司 一种肿头综合症发病鸡眶下窦中不同种类细菌的鉴定方法
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