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申请/专利权人：湖北健肽生物科技有限公司

摘要：一种高纯度大豆活性肽的分离纯化方法，括以下步骤:1极限酶解预处理:取脱脂大豆粉,加入15‑25倍量的水,再加入1.0‑2.0％的低聚糖和0.5‑1.5％的半纤维素酶制剂,在105‑125℃、压力0.12‑0.18MPa条件下处理20‑30min,然后降温至45‑55℃,调节pH至7.0‑8.0,得到预处理大豆蛋白悬浮液；2双酶协同酶解:向预处理的大豆蛋白悬浮液中,先加入3000‑7000Ug蛋白的中性蛋白酶,再加入3000‑7000Ug蛋白的碱性蛋白酶,于50‑60℃酶解2‑4h,过程中通过滴加氢氧化钠溶液维持体系pH在7.5‑8.5,酶解结束后于90‑100℃灭酶10‑20min,得到酶解液；3超滤‑活性炭吸附耦合分离；4反相色谱分离纯化；5赋形与包装:取活性肽冻干粉,加入15‑25％的低聚果糖,混合均匀后分装,即得大豆活性多肽产品。

主权项：1.一种高纯度大豆活性肽的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:1极限酶解预处理:取脱脂大豆粉,加入15-25倍量的水,再加入1.0-2.0％的低聚糖和0.5-1.5％的半纤维素酶制剂,在105-125℃、压力0.12-0.18MPa条件下处理20-30min,然后降温至45-55℃,调节pH至7.0-8.0,得到预处理大豆蛋白悬浮液；2双酶协同酶解:向预处理的大豆蛋白悬浮液中,先加入3000-7000Ug蛋白的中性蛋白酶,再加入3000-7000Ug蛋白的碱性蛋白酶,于50-60℃酶解2-4h,过程中通过滴加氢氧化钠溶液维持体系pH在7.5-8.5,酶解结束后于90-100℃灭酶10-20min,得到酶解液；3超滤-活性炭吸附耦合分离:将酶解液依次通过10kDa和1kDa的超滤膜,收集1kDa的透过液,再用大孔吸附树脂脱盐,然后在40-50℃条件下加入5-10％活性炭吸附1-3h,经0.2-0.8μm膜除去活性炭,得到活性多肽溶液；4反相色谱分离纯化:将活性多肽溶液用预涂覆PEG作用相的反相硅胶为固定相,含0.05-0.15％TFA的水乙腈梯度体系为流动相进行RP-HPLC分离,收集纯度≥90％的活性肽组分,脱盐后真空冷冻干燥；5赋形与包装:取活性肽冻干粉,加入15-25％的低聚果糖,混合均匀后分装,即得大豆活性多肽产品。

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