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申请/专利权人：聊城金歌合成材料有限公司;聊城大学

摘要：本发明公开了一种时空限域型DNA纳米探针介导SERS和FL双信号检测miRNA‑21策略方法。包括如下步骤：（1）金纳米星（GNS）、金纳米颗粒（GNP）制备，（2）GNS‑HP@荧光报告探针P1复合探针制备，（3）靶标识别和聚合切刻反应，（4）将步骤（2）的探针与步骤（4）聚合切刻反应液、SERS报告探针P2、GNP共孵育，进行荧光和拉曼检测。基于相邻GNS的回文序列杂交和通过Au‑S键锚定GNP，可实现GNS和GNP在三维空间的周期性排布，形成大尺寸三维DNA纳米结构，在局域空间内形成高密度热点实现了拉曼和荧光信号的高强度输出。该“时空限域”型DNA复合探针不仅具有良好血清稳定性，而且能够同时精准检测不同癌细胞中靶标miRNA‑21的表达水平，在生物临床领域具有重要的应用价值。

主权项：1.一种时空限域型DNA纳米探针介导SERS和FL双信号检测miRNA-21策略方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）金纳米星（GNS）、金纳米颗粒（GNP）制备首先通过经典水热法合成金纳米颗粒（GNP）作为种子，再经过柠檬酸钠还原AuNPs，制备出具有多面尖刺结构的金纳米星颗粒（GNS）；（2）GNS-HP@P1复合探针制备金纳米星（GNS）上的发夹探针HP与荧光报告单元P1（FAM-P1）部分杂交后，FAM的荧光被猝灭；（3）靶标识别和聚合切刻反应a、针对靶标miRNA-21设计模板链T1，将模板链T1与待测样本混合，模板链T1与靶标形成双链结构后，在KFP聚合酶和Nb.BbvCI酶的作用下发生聚合切刻反应产生大量切刻产物T2，切刻产物T2的3'端片段为回文序列，中间用于捕获发夹探针HP，5'端用于捕获SERS报告探针P2；b、金纳米星（GNS）上的大量发夹探针HP与荧光报告探针P1（FAM-P1）部分杂交后，FAM的荧光被猝灭；发夹探针HP随后杂交SERS报告探针P2和切刻产物T2，荧光恢复露出回文序列；（4）将步骤（2）的探针与步骤（3）聚合切刻反应液、SERS报告探针P2、金纳米颗粒GNP共孵育；发夹探针HP随后杂交SERS报告探针P2和切刻产物T2使得发夹探针HP打开，荧光恢复露出回文序列；最后，通过相邻GNS的回文序列杂交和Au-S键锚定GNP，自组装成类“聚焦定日镜”的3DDNA纳米结构，进行荧光和拉曼检测。

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