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申请/专利权人：清华大学
摘要：本发明涉及一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法，本发明的方法是一种利用酵母展示和酵母交配系统实现筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度，根据本发明的方法，将TCR和pMHC分别展示到不同交配型酵母表面，然后进行酵母交配实验，进而通过酵母交配系统中TCR与pMHC互相作用形成的二倍体酵母细胞来筛选并确定TCR及其与特定抗原相互作用强度。同时通过计算所述筛选并确定出的每种TCR序列的差异倍数foldchange值，由此确定出与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度。
主权项：1.一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法，其包括：a将所述特定抗原-MHC复合物pMHC和TCR文库分别展示到不同交配型酵母细胞表面；b共培养所述不同交配型酵母细胞；c筛选出酵母细胞二倍体，并确定出所述酵母细胞二倍体中的TCR序列；d计算所述确定出的每种TCR序列的差异倍数foldchange值，根据所述差异倍数foldchange值，确定出与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度；展示TCR的酵母细胞以整合形式表达TCR；展示pMHC的酵母细胞以整合形式表达pMHC；所述TCR文库的质粒载体包括ysyna_DEST质粒载体、片段1和片段2；所述片段1为TCR的Vα区，所述片段2为TCR的Vβ区；所述片段1和片段2均与ysyna_DEST质粒载体有15bp同源臂，所述片段1和片段2相互之间具有20bp同源序列；所述TCR文库中的TCR序列之间的不同在于CDR3序列不同；所述差异倍数foldchange值的计算包括如下步骤：1酵母细胞二倍体中筛选出的每种TCR序列的reads数除以测得的所有TCR序列的reads数，得到一个ratio实测；2将ratio实测除以针对阴性对照组的ratio对照实测，得到文库中每个TCR序列的差异倍数foldchange值。
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权利要求：
百度查询： 清华大学 一种筛选并确定与特定抗原相互作用的TCR及其与特定抗原相互作用强度的方法
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