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申请/专利权人：湖南科锐斯医药科技有限公司
摘要：本发明涉及一种测定熊去氧胆酸及其代谢物浓度的生物分析方法。以UDCA‑d4、GUDCA‑d4和TUDCA‑d5为混合内标工作液，采用TriartC18ExRS色谱柱，通过LC‑MSMS法准确地检测人血浆中熊去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸和牛磺熊去氧胆酸的浓度，并指出熊去氧胆酸和猪去氧胆酸、甘氨熊去氧胆酸和甘氨鹅去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸和牛磺猪去氧胆酸的特异分离的关键，证明了该分析方法具有专属性选择性。本发明方法检测灵敏度高，能够满足临床研究样品分析需求。
主权项：1.一种测定熊去氧胆酸及其代谢物浓度的生物分析方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：样品前处理，取待测样品加入UDCA-d4、GUDCA-d4和TUDCA-d5混合内标工作液，涡旋；加入蛋白沉淀剂，涡旋振荡，离心；取上清液加入稀释剂稀释，涡旋混匀后进行LC-MSMS分析；步骤二：色谱分离，色谱条件：色谱柱为TriartC18ExRS，2.1mm×100mm，1.9μm；进样量为2μL；柱温为35℃；流动相A为2mM乙酸铵水溶液；流动相B为体积比为1:1的甲醇-乙腈溶液；梯度洗脱程序为 步骤三：质谱检测，具体参数为 步骤四：标准曲线制备，配制UDCA、GUDCA和TUDCA混合标准品工作液，稀释到PBS中配制成待测物标准曲线样品，按步骤一至步骤三进行LC-MSMS方法检测，分别再以UDCA、GUDCA、TUDCA的色谱峰面积与对应内标峰面积的比值为纵坐标，以UDCA、GUDCA、TUDCA浓度与各自内标浓度的比值为横坐标，制备标准曲线回归方程；步骤五：血浆样品待测物测定，将待测血浆样品按步骤一至步骤三进行LC-MSMS方法检测，分别将UDCA、GUDCA、TUDCA的色谱峰面积与内标峰面积的比值、内标浓度代入相应的标准曲线回归方程，计算样品中待测物的浓度。
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