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申请/专利权人：江苏蜂奥生物科技有限公司

摘要：本发明涉及一种枇杷蜂蜜的检测鉴别方法，采用高效液相色谱结合指纹图谱方法以及高效液相色谱定量分析方法，检测鉴别枇杷蜂蜜，其中，高效液相色谱法结合指纹图谱指认出枇杷蜂蜜中同时含有茴香酸，绿原酸、异绿原酸、3‑O‑对香豆酰基奎宁酸、5‑O‑阿魏酰奎宁酸、金丝桃苷即槲皮素‑3‑O‑葡萄糖苷、顺,顺,顺‑三‑对‑香豆酰亚精胺、顺,顺,反‑三‑对‑香豆酰亚精胺、顺,反,顺‑三‑对‑香豆酰亚精胺以及反,反,反‑三‑对‑香豆酰亚精胺，则可判定所述待测蜂蜜为枇杷蜂蜜。本发明为枇杷蜂蜜真实性及品质评价体系的构建提出了新的方法，具有专属性高、检测灵敏度好，具有良好的经济价值和社会意义。

主权项：1.一种枇杷蜂蜜的检测鉴别方法，其特征在于，采用高效液相色谱结合指纹图谱方法以及高效液相色谱定量分析方法，检测鉴别枇杷蜂蜜，其中，所述高效液相色谱法结合指纹图谱指认出枇杷蜂蜜中含有茴香酸以及绿原酸、异绿原酸、3-O-对香豆酰基奎宁酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、茴香酸、金丝桃苷、顺,顺,顺-三-对-香豆酰亚精胺、顺,顺,反-三-对-香豆酰亚精胺、反,顺,反-三-对-香豆酰亚精胺、反,反,反-三-对-香豆酰亚精胺；所述茴香酸具有式（Ⅰ）所示的结构：且所述茴香酸的保留时间为51.94min；所述高效液相色谱法中，流动相A是浓度为0.2vv%的乙酸水溶液，流动相B是浓度为0.2vv%的乙酸甲醇溶液；所述高效液相色谱法中，梯度洗脱程序为：0~11min，流动相B由5vv%上升至11vv%；11~14min，流动相B由11vv%上升至14vv%；14~17min，流动相B由14vv%上升至15vv%；17~24min，流动相B由15vv%上升至16vv%；24~28min，流动相B由16%上升至17%；28~30min，流动相B由17vv%上升至22vv%；30~38min，流动相B由22vv%上升至25vv%；38~41min，流动相B由25vv%上升至30vv%；41~46min，流动相B由30vv%上升至33vv%；46~55min，流动相B保持33%不变；55~60min，流动相B由33vv%上升至34vv%；60~70min，流动相B由34vv%上升至36vv%；70~80min，流动相B由36%上升至40%；80~90min，流动相B由40vv%上升至45vv%；90~100min，流动相B由45vv%上升至52vv%；100~110min，流动相B由52vv%上升至57vv%；110~120min，流动相B由57%上升至65%；120～130min，流动相B由65vv%上升至70vv%；130~135min，流动相B由70vv%上升至80vv%；流动相A随流动相B的体积变化而变化，两者体积加和为100%；所述高效液相色谱法中，包括以下色谱条件：色谱柱为PhenomenexGeminiC18色谱柱，流速为0.6~0.8mLmin，进样量为10~30μL，柱温为34~36℃，检测波长为280nm；所述高效液相色谱法中，还包括前处理步骤：S1：将待测蜂蜜与适量水混合后，使蜂蜜充分溶解获得蜂蜜水溶液，调节所述蜂蜜水溶液pH值为6.5~7，然后以8800~9200rpm的转速将其离心18~22min后，取上清液备用；S2：采用Strata-X-A固相萃取柱提取S1获得的上清液，以甲醇活化固相萃取柱，然后采用超纯水平衡萃取柱，然后将所述上清液上样后，再以去离子水淋洗，之后采用含9~11vv%甲酸的甲醇溶液洗脱，提取所述上清液中的活性成分获得洗脱液，然后将获得的洗脱液吹干，以适量甲醇复溶后，过滤获得，其中，所述甲醇、超纯水、去离子水以及含9~11vv%甲酸的甲醇溶液的用量均为2~4倍量的柱体积。

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