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申请/专利权人：杭州师范大学
摘要：本发明公开了一种基于双酶级联反应介导的高通量鉴别食源性致病菌的方法，在本方法中首先使细菌与底物充分反应，然后加入TMB、二氧化锰纳米花、盐酸使其刻蚀金纳米棒，从而根据颜色以及紫外峰的不同进行线性判别分析，对食物中的细菌种类进行鉴别。本方法简单方便、高效灵敏，实现了高通量鉴别，结果仅用肉眼就可进行观察，可以用于食品安全检测方面。
主权项：1.一种基于双酶级联反应介导的高通量鉴别食源性致病菌的方法，主要包括以下步骤：步骤1、将样品预处理液与底物L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁盐水合物AAP在DEA缓冲液中混合均匀后在37℃、碱性环境条件下孵育20～40分钟，得到混合液A1；所述样品预处理液是将待检测食物粉碎后用PBS缓冲液稀释，在细胞破碎机上破碎制备得到的；步骤2、在混合液A1中依次加入醋酸-醋酸钠缓冲液、二氧化锰钠米花和3,3',5,5'-四甲基联苯胺TMB，混合均匀后在37℃条件下孵育2～7分钟，得到混合液A2；TMB浓度为5～10mM；步骤3、待反应完全后向混合液A2中加入盐酸终止反应，混合均匀后在37℃条件下孵育2～7分钟，加入金纳米棒溶液，金纳米棒与氧化剂发生反应，金纳米棒刻蚀2～7min；步骤4、利用紫外分光光度计测量金纳米棒吸收光谱，通过软件提取颜色的RGB值，线性判别分析从而完成对不同细菌的鉴别；所述细菌为副溶血性弧菌VP，金黄色葡萄球菌SA，肠炎沙门氏菌SE，李斯特菌LM，大肠杆菌E.Coli。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 杭州师范大学 基于双酶级联反应介导的高通量鉴别食源性致病菌的方法
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