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申请/专利权人：中国药科大学
摘要：本发明公开了一种筛选PCSK9‑LDLR结合抑制剂的方法。本发明整合纳米材料与阵列传感器实现对PCSK9‑LDLR相互作用的高灵敏化学发光CL成像传感，据此建立超敏、快捷、高通量的PCSK9‑LDLR结合抑制剂筛选技术体系，为PCSK9‑LDLR结合抑制剂的药效评价和新药发现提供了一种新颖的技术。本发明方法经过PCSK9‑LDLR结合抑制剂阳性药物的验证，并发现了一种未被报道过的PCSK9‑LDLR结合抑制剂薯蓣皂苷。本发明提供的方法显著优于现有技术，具体突出的实质性特点和显著的进步。
主权项：1.一种筛选PCSK9-LDLR结合抑制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，金纳米粒子AuNPs溶液的制备：在反应容器中加入适量氯金酸溶液，边搅拌边加热至沸腾，维持沸腾适当时间后快速加入适量柠檬酸三钠溶液，边搅拌边加热并观察反应；待观察到溶液颜色变成透亮的酒红色，停止加热，继续搅拌使溶液冷却，得到AuNPs溶液，低温避光保存；步骤S2，负载辣根过氧化物酶HRP与PCSK9蛋白的AuNPs的制备：调节AuNPs溶液的pH至弱碱性，加入适量PCSK9蛋白溶液、HRP蛋白溶液，温和搅拌适当时间，离心，沉淀用PBS溶液重新分散，重复离心、分散适当次数，得到PCSK9蛋白、HRP蛋白负载的AuNPs溶液，即HRP@AuNP-PCSK9溶液；步骤S3，LDLR阵列传感器构建：在表面清洗干净的醛基改性玻璃片上粘贴一层刻有若干个孔的不感光膜，形成含有多个检测位点的传感器阵列；在各检测位点上分别加入适量LDLR蛋白溶液，低温过夜，冲洗除去未结合的LDLR，使用合适的其它蛋白溶液封闭各检测位点上未结合LDLR的苯甲醛基团；步骤S4，化学发光成像：在LDLR阵列传感器的各检测位点中分别加入适量HRP@AuNP-PCSK9溶液及适量待测样品，常温孵育一定时间后用超纯水洗去未反应试剂，在阵列传感器上加入适量鲁米诺溶液和过氧化氢溶液，产生化学发光后动态积分成像。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国药科大学 一种筛选PCSK9-LDLR结合抑制剂的方法
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