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申请/专利权人：中国科学院深圳先进技术研究院
摘要：本发明公开一种重组杆粒制备系统及BmNPV‑rAAV重组杆粒，重组杆粒制备系统包括：a包含可控丢失的辅助质粒和改造的杆状病毒基因组的DH10pureBac感受态细胞，b可控丢失的转移载体。本发明BmNPV‑rAAV重组杆粒为包含重组腺相关病毒Cap基因表达框、核心表达元件ITR‑GOI及Rep基因表达框的单一BmNPV杆粒。本发明解决了Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统中辅助质粒和转移载体的残留问题，且技术流程简单。
主权项：1.一种重组杆粒制备系统，其特征在于，所述重组杆粒制备系统包括：a包含可控丢失的辅助质粒和改造的杆状病毒基因组的DH10pureBac感受态细胞，b可控丢失的转移载体；所述包含可控丢失的辅助质粒和改造的杆状病毒基因组的DH10pureBac感受态细胞的制备方法，包括以下步骤：1制备可控丢失的辅助质粒：将编码Tn7转座酶的辅助质粒中的起始复制子Ori替换成温度敏感复制子和反向筛选元件，得到可控丢失的辅助质粒；2改造杆状病毒基因组：从Bac-to-Bac系统中分离出杆状病毒基因组，利用RedET重组技术将基因组中mini-attTn7从Polh位点移至ODV-E56位点且细菌复制调控元件仍置于Polh位置，或者将mini-attTn7移至任何除了ODV-E56位点之外其他不影响杆状病毒包装的位点且细菌复制调控元件仍置于Polh位置，得到改造的杆状病毒基因组；3将步骤1可控丢失的辅助质粒和步骤2改造的杆状病毒基因组转化至MegaXDH10BT1R感受态细胞中，在30℃条件下制备成包含可控丢失的辅助质粒和改造的杆状病毒基因组的DH10pureBac感受态细胞；所述可控丢失的转移载体至少包含抗菌素抗性标记、温度敏感复制子、Tn7转座元件及外源蛋白基因表达框。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院深圳先进技术研究院 一种重组杆粒制备系统及BmNPV-rAAV重组杆粒
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