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申请/专利权人：浙江大学
摘要：本发明提供了一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆及构建方法和应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆的构建方法，将猪丁型冠状病毒的基因组划分为若干个片段，基于酵母同源重组的一步法完成克隆构建，具有高效、快速、稳定等特点。本发明所述感染性cDNA克隆具有良好的稳定性，可直接利用CRISPRCas9基因编辑在基因水平上改造猪丁型冠状病毒基因组。本发明提供的感染性cDNA克隆可直接通过转染哺乳动物细胞拯救重组病毒，简化了病毒拯救操作流程。本发明还提供了可表达HiBiT标签蛋白的猪丁型冠状病毒感染性克隆的构建方法，为深入研究猪丁型冠状病毒感染机制提供了良好的技术手段。
主权项：1.一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1以猪丁型冠状病毒的cDNA为模板，利用引物对扩增出猪丁型冠状病毒基因组的若干个片段，且扩增得到的相邻两个片段包含相同的末端同源臂；2将线性化的真核表达载体与步骤1扩增得到的若干个片段混合后转化酵母细胞，筛选阳性克隆；所述线性化的真核表达载体的两端分别包含有与步骤1扩增得到的首尾两个片段相同的末端同源臂；3将步骤2筛选得到的阳性克隆转化大肠杆菌，获得的重组质粒为所述猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学 一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆及构建方法和应用
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