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申请/专利权人：中国科学院大连化学物理研究所

摘要：本发明公开了一种食管鳞状细胞癌的暴露风险因子筛查方法。针对人血清样本，采用超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱定量监测外源性暴露物，通过构建基于内标校正线性曲线对原始峰面积进行定量分析，对高频检出的暴露物进行非参数检验和二元逻辑回归分析确定潜在风险因子，最后利用细胞实验对筛查的风险因子进行生物学验证。该发明为食管鳞状细胞癌的环境暴露风险因子筛查提供了参考，对疾病风险评估具有重要意义。

主权项：1.一种食管鳞状细胞癌的环境暴露风险因子筛查方法，其特征在于：包括如下步骤：一确定待筛查的环境暴露风险因子即，待筛查的外源性暴露物，选取2种以上待筛查的环境暴露风险因子相对应的内标；二取50例以上食管鳞状细胞癌患者的人血清样本，作为病例组；取50例以上非食管鳞状细胞癌患者的健康人的血清样本，作为对照组；利用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用分析平台分别对病例组和对照组人血清样本中的外源性暴露物进行采集，获得病例组和对照组中每个人的人血清样本质谱的原始数据；从原始数据中获取血清中外源性暴露物和内标物的峰面积；三潜在风险暴露物的筛查锁定：1数据的归一化处理与内标选择具体实施过程：在步骤二的所有样本的质谱分析中，插入2个以上的QC样本，等体积量的病例组和对照组血清样本混合为QC样本；将QC样本中内标和暴露物的原始峰面积数据导出后，利用2个以上的内标分别对待筛查的外源暴露物的原始峰面积进行校正得到相对峰面积数据，然后计算暴露物相对峰面积在所有QC样本中的相对偏差RSD，最终选择RSD最小的内标用于定量峰面积结果的校正；2标准线性曲线及定量限的确定具体实施过程：在样本分析过程中，插入1组以上的基质添加胎牛血清作为基质加标线性分析，加入5个以上不同浓度待筛查的外源暴露物的5个以上线性样本，用于构建线性曲线确定定量限，每一个线性样本中所有暴露物浓度保持一致；通过超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱对线性样本的暴露物进行测定，用暴露物峰面积除以其对应的内标遵循上述RSD最小原则选择的内标的峰面积得到相对峰面积，构建相对峰面积y与实际加入浓度x的回归方程y＝ax+b，a为线性方程的斜率，b为线性方程的截距常数，相关性系数R2满足大于99％以上即可用于定量；3采用非参数检验和二元逻辑回归分析锁定风险暴露物；具体实施过程：将监测样本的原始峰面积数据导出，并通过内标校正得到相对峰面积数据，然后利用线性曲线对内标校正过的相对峰面积数据进行定量分析，得到定量结果数据；然后对定量数据中低于最低定量限的结果或未测到的缺失值进行无效值赋值，赋值取最低定量限的12，以用于后续的统计学分析；随后通过计算暴露物在所有样本中检出率检出率＝检出样本数样本总数来判断其是否为高频检出暴露物满足检出率大于30％的暴露物被定义为高频检暴露物最终选择高频检出且满足QC样本中RSD小于30％的暴露物的定量数据，利用R语言程序和RStudio软件进行非参数检验，锁定在病例组和对照组之间存在显著性差异的暴露物满足p0.05；利用存在显著性差异的暴露物的定量数据，通过R语言程序和RStudio软件进一步通过二元逻辑回归分析计算具有显著性差异的暴露物的风险值Oddsratio,OR，初步确定潜在暴露风险因子；然后利用利用暴露风险因子的定量数据，通过R语言程序和RStudio软件对暴露风险因子与食管鳞状细胞癌的相关性进行分析，根据相关性分析结果检验潜在暴露风险因子与疾病是否存在显著性相关。

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