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申请/专利权人：合肥华琪生物工程有限公司

摘要：本发明提供一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的方法以及所用的保存液，适用于多种器官保存。离体肝脏在本发明所述器官保存液保存以及机械灌注过程中能够存活超过24h，肝脏微循环结构完整，未见明显损伤，胆汁分泌功能良好，肝脏合成与代谢功能良好，大大延长肝脏体外保存的时间，并提升后期肝移植患者术后生存率。

主权项：1.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的心脏保存液，其特征在于所述保存液由如下组分所组成：NaCl5.9gL，KCl0.75gL，MgSO40.6gL，KH2PO43.4gL，氟苯尼考1mLL，羟乙基淀粉6gL，透明质酸钠10mgL，维生素C100mgL，水合氯醛100mgL，地塞米松8mgL，葡萄糖0.54gL，三磷酸腺苷10μmolL，姜黄素1mgL，环孢素A0.5mgL，利多卡因1mgL，胰岛素0.2UL，棉子糖依据渗透压适量添加，在无菌条件下，取部分去离子水，将上述物质首先加入去离子水中，混匀后并使用盐酸和氢氧化钠调节pH至7.35-7.45，再最终定容至1000mL，并进行超饱和鼓氧，至液体中氧气超饱和，所述保存液的渗透压为290-350mosmkgH2O，胶体渗透压为30.0mosmkgH2O，盐度为9.0。

全文数据：一种器官保存液技术领域本发明提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的液体，特别是提供了一种器官保存液，适用于多种器官的体外保存。属于医疗设备领域。背景技术目前器官移植是终末期器官病变、癌症以及急性器官衰竭的一种不可替代的治疗手段，然而在中国乃至世界范围内，多种器官供体极度紧缺。而在通常的器官移植过程中，器官的保存效果直接影响手术的成败和病人的术后存活。而对于器官保存影响最大的则是与器官直接接触的保存液。自1987年UniversityofWisconsinsolutionUW液问世以来，领域内研究者对于器官保存液进行了不懈的研究和改进。目前器官保存液的金标准是UW液。UW液由于含有羟乙基淀粉，导致液体高粘性，延长了灌注时间，导致器官微循环结构损伤，无法很好地应用到目前广泛使用的器官机械灌注。UW液是细胞内保存液，具有很高的钾离子含量125mM，而高浓度的钾离子会导致血管收缩，影响保存液的效果以及机械灌注的效果，并且在使用过程中，UW液必须被血液一次性冲走替代，才能避免高浓度钾离子流入病人体内，造成对生理尤其是心脏的影响，且由于UW液昂贵的成本，应用受到限制。目前多种器官移植供体保存与运输中使用的器官保存液，大多局限于在UW液的基础上进行改进，其中无血保存液携氧能力低，成本高，而含血细胞成分器官保存液在操作复杂、易凝血或溶血等缺陷，且易引入未知病毒。进行器官移植时，需要将供体器官分离并且经过体外保存，才能后续移植到受体体内。现有的技术中器官体外保存液均存在携氧能力低或者使用血液制品存在各种风险的问题，无法兼具高含氧量和低风险的特点。例如，公开号为CN101199273A的专利所公开的多器官储存保护液具有能够降低缺血-再灌注损伤的作用，但是无法提供有效的氧气供给，无法长时间保存器官。公开号为CN104996396A的专利使用全血作为保存液主体，存在凝血、溶血等风险，且可能带入未知血液病毒感染，对于受体病患风险很大。公开号为CN101199273A的专利公开了一种新型多器官储存保护液，用褪黑素、维生素C和水溶性维生素E组成的抗氧化系统，用以降低器官储存过程中自由基生成导致的氧化损伤；用甘露醇维持溶液渗透压与降低溶液粘滞度；使用低浓度葡萄糖以适应器官最低代谢要求，但是仍然无法做到供应器官移植供体足够氧气消耗。专利US20090239206A1公布了一种NewET-Kyotosolution器官保存液，将联丁酰基-cAMP作为添加剂，但仍然无法做到提供足够的氧气供给。而公开号为CN104996396A的专利公开了一种离体肝脏灌注保存液，使用全血作为肝脏供给，操作复杂易感染，且易引起溶血、凝血等不利情况，肝脏保存风险高，并且肝脏保存后出现了轻微肿胀的情况。公开号为CN103893205A公开了一种包含利多卡因和腺苷的心脏停搏液及其制备方法，使用利多卡因和腺苷是发挥其促使心脏停搏作用。器官低温保存实质上是模拟动物冬眠时的生理状态。冬眠机制下，冬眠哺乳动物在极低的环境温度下生存数月，没有食物或水，但是能够从冬眠中醒来后，没有明显的器官损伤。而人类在正常的生理条件下则不具备这一能力，要达到类似“冬眠”状态，需要冬眠保护剂的存在，目前，冬眠合剂作为冬眠保护剂已经在临床抢救危重病人时得到广泛应用。一项对来自正常体温大鼠和活跃及冬眠黄鼠的肝脏在特制的保护液溶液中对低温保藏的耐受力研究显示，在48h的冷藏保存后，大鼠的肝脏细胞明显被破坏，表现为肝脏酶的释放和胆汁分泌量减少；相反，来自冬眠黄鼠的肝脏在96h的冷藏后表现出很小的损伤CareyHV,AndrewsMT,MartinSL.Mammalianhibernation:cellularandmolecularresponsestodepressedmetabolismandtemperature[J].PhysiologicalReviews,2003,834:1153-1181.。研究表明，与非冬眠动物相比，冬眠动物能抵抗缺血再灌注对组织和器官的损伤FrerichsKU，HallenbeckJM.Hibernationingroundsquirrelsinducesstateandspecies-specifictolerancetohypoxiaandaglycemia:aninvitrostudyinhippocampalslices[J].JournalofCerebralBloodFlow&MetabolismOfficialJournaloftheInternationalSocietyofCerebralBloodFlow&Metabolism.1998,182:168；另有研究表明，应用能够通过使用类鸦片样化合物DADLE[D-Ala2,D-Leu5]-enkephalinDADLE[D-Ala2,D-Leu5]-脑啡肽的一种合成阿片样物质将动物器官在实验室中保存46小时，所述保存方法为多器官共同保存并与连接的静脉相连EDRatigan，DBMckay.Exploringprinciplesofhibernationfororganpreservation[J].TransplantationReviews.2015,301:13-19。随着器官捐献成为器官移植供体的主要来源，器官捐献案例随时随地可能出现，器官保存的时间以小时计算，而且终末期病患时刻会受到生命的威胁，宝贵的器官移植供体每年都会因保存时间过长或保存质量低导致被丢弃。所以有必要研制更加优越的器官保存液，提高器官捐献的利用率。发明内容为解决上述技术问题，本发明提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的液体，特别是提供了一种器官保存液，维持器官移植供体体外保存过程中的存活与功能，适用于多种器官的体外保存。本发明技术方案是：提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的方法，其包括使所述细胞与保存液接触的步骤，其特征在于所述的保存液含有如下组分：a能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；b能量底物；c清除代谢产物的清除剂；d胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂；e氧气。优选地，上述所述的方法，其中所述的保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。上述所述的方法，其用于器官的保存；优选地，其中所述的器官为肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道等。还提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的保存液，含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂和去离子水，其特征在于所述保存液还含有如下组分：a能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；b能量底物；c清除代谢产物的清除剂；d胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂；e氧气。优选地，上述所述的保存液，其特征在于所述保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。上述所述的方法或者所述的保存液，其中：所述的基本盐类，是保持细胞膜内、外盐的平衡的物质，其包括但不限于氯化钠、氯化钾、硫酸镁等中的一种或者两种以上；优选地，所述的基本盐类为氯化钠、氯化钾和硫酸镁。基本盐类的用量，例如可以为1000ml保存液中含基本盐类物质为2.0g-25.0g，优选为2.0g-23.0g，更优选为5.0g-10.0g。所述pH缓冲剂是相对维持pH值稳定的物质，例如其可以选自HEPES盐羟乙基哌嗪乙磺酸盐，例如羟乙基哌嗪乙磺酸钠等、磷酸盐例如磷酸钠、磷酸钾等、碳酸盐例如碳酸钠、碳酸钾等、磷酸氢盐例如磷酸二氢钾、磷酸氢钠等、碳酸氢盐例如碳酸氢钠、碳酸氢钾等、组氨酸中的一种或者两种以上；所述pH缓冲剂其合适用量，例如可以为1000ml保存液中含pH缓冲剂物质为0.5g-10.0g，优选为2.0g-10.0g，更优选为3.0g-5.0g。所述的冬眠保护剂是抑制细胞代谢、保护细胞基质和或维持细胞膜稳定的物质，包括但不限于抑制细胞信息通路的抑制剂、神经递质拮抗剂，钠、钾或钙离子通道阻滞剂等中的一种或者两种以上；优选地，所述的冬眠保护剂选自水合氯醛、利多卡因、阿托品、普鲁卡因、硝本地平、苯妥英钠、盐酸胺碘酮、东莨菪碱、山莨菪碱等中的一种或者两种。所述冬眠保护剂的合适用量，例如可以为1000ml保存液中含冬眠保护剂物质为0.05g-5.0g，优选为0.1g-1.0g。所述能量底物，例如选自三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、磷酸腺苷、乙酰辅酶A、胰岛素、葡萄糖中的一种或者两种以上；优选地，所述的能量底物为三磷酸腺苷或二磷酸腺苷。能量底物的用量，例如可以为1000ml保存液中含能量底物为0.001g-3.0g，优选为0.1g-1.0g。所述清除代谢产物的清除剂是选自清除引起细胞死亡的代谢产物的物质中一种或两种以上；优选地，所述清除剂选自维生素C、鱼藤酮、奥苷嘌醇、N-硝基-L-精氨酸甲酯、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、异抗坏血酸钠、植酸、茶多酚中的一种或者两种以上。所述清除剂的用量，例如可以为1000ml保存液中含所述清除剂物质为0.1g-5.0g，优选为0.1g-2.0g。所述的胶体渗透压维持剂是维持毛细血管内外水的稳定性的物质，例如选自羟乙基淀粉、透明质酸盐、透明质酸、甘露醇中的一种或者两种以上；所述胶体渗透压维持剂的用量，例如可以为1000ml保存液中含所述胶体渗透压维持剂物质为0.5g-10.0g，优选为5.0g-10.0g。所述的胶体渗透压调节剂，例如选自棉子糖、右旋糖酐、白蛋白、葡聚糖中的一种或者两种以上。所述胶体渗透压调节剂的用量，可以依据需要的渗透压适量添加，例如调节所述保存液渗透压为290-380mOsmkgH2O，其中胶体渗透压为1.5-30.0mOsmkgH2O。所述的抗生素是抗微小病原体等引起的感染的物质，例如选自氟苯尼考、青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、头孢菌素、土霉素、红霉素、粘菌素、灰黄霉素中的一种或者两种以上；所述抗生素的用量，例如可以为1000ml保存液中含抗生素物质为0.1g-2.0g，优选为0.1g-1.0g。所述的抗炎药物是用于治疗组织受到损伤后所发生的反应炎症的药物，例如选自姜黄素、芬必得、莫比可、阿司匹林、对乙酰氨基酚、双氯芬酸、吲哚美辛、布洛芬、芬布芬中的一种或者两种以上；所述抗炎药物的用量，例如可以为1000ml保存液中含抗炎药物为0.001g-1.0g，优选为0.001-0.05g。所述的免疫抑制剂是抑制免疫反应的物质，例如选自环孢素A、他克莫司、环磷酰胺、雷帕霉素、硫锉嘌呤、甲氨蝶呤、糖皮质激素例如地塞米松中的一种或者两种以上。所述免疫抑制剂的用量，例如可以为1000ml保存液中含免疫抑制剂为0.001g-1.0g，优选为0.005g-0.05g。优选地，本发明提供一种上述所述的保存液，其含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂、冬眠保护剂、能量底物、清除代谢产物的清除剂、胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂、抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂、氧气和去离子水。优选地，所述的保存液，每1000mL的保存液含有：优选地，上述所述的保存液，其特征在于所述保存液的pH值为7.4±0.1，盐度为9.0，渗透压为290-380mOsmkgH2O，其中胶体渗透压为1.5-30.0mOsmkgH2O。本发明上述所述保存液，优选地作为维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的保存液的应用；优选地，所述保存液作为器官保存液的应用；更优选地，所述的器官选自肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道。与现有的器官保存液相比，本发明的器官保存液技术主要是：1利用低温降低组织和细胞的代谢率。2在低温环境下利用细胞膜通透性的增加，提供细胞所需的直接能量如三磷酸腺苷。3直接提供细胞所需的溶解氧，彻底杜绝细胞和组织因缺氧所引起的一系列后续损伤。4在细胞信号传导方面利用神经递质拮抗剂如拮抗神经递质乙酰胆碱的阿托品抑制细胞活动。5利用钠、钾、钙离子通道的阻滞剂，阻止其在低温环境下向细胞内传递信号，抑制细胞的活动。6本发明特别注意保护血管内皮细胞外基质，使其在低温环境下依然能够保持生理状态以保证肝脏微小循环通畅。从而保证了内环境的稳定。7从维护细胞器线粒体的稳定性出发降低再灌注时的细胞凋亡。本发明将冬眠保护剂应用到器官保存液中，能够使器官进入冬眠状态，延长保存时间，并且能够增强器官对缺血-缺氧的抗性，尤其能够提高内皮细胞对低温的耐受。本发明中，器官在保存过程中诱导进入类似冬眠的状态，代谢的大幅度降低，各项功能的暂时休眠，能够保护器官免受不利环境影响，保存活性和功能，不仅能够更好地更长时间进行保存，而且能够使器官对缺血再灌注损伤具有更强的耐受性。常规低温保存器官从实质上就是在模拟动物冬眠状态，低温能够降低代谢，不过通常的低温保存都存在缺陷，如不能很好地在低温下维持器官细胞尤其是内皮细胞的状态，而冬眠动物存在多种机制允许器官进入低温状态并在冬眠结束复温后不出现损伤，并且冬眠-苏醒-冬眠这一过程在动物整个冬眠期间反复进行。本发明提供的维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的液体，在物理降温配合下，冬眠保护剂能使器官移植供体进入一种类似"冬眠"的状态，降低器官细胞代谢，可降低器官对各种病理刺激的反应，提高各器官内各种细胞对缺氧的耐受力，在病理情况下处于异常收缩的小动脉得以舒张，微循环得到改善，能够延长器官移植供体体外保存的时间并提高保存质量。离体肝脏在本发明所述肝脏器官保存液以及机械灌注过程中能够存活超过24h，肝脏微循环结构完整，未见明显损伤，胆汁分泌功能良好，肝脏合成与代谢功能良好。本发明可以满足临床肝脏体外灌注保存的需要，大大延长肝脏体外保存的时间，并提升后期肝移植患者术后生存率。本发明既能满足临床需要，并且具有成本低廉的特点。与现有技术相比，本发明提供的器官保存液具有以下有益效果：1提供的器官保存液能够用于多种器官的冷却、灌洗和体外保存，可有效保存、肝脏、心脏超过24小时，其中可保存肾脏72小时。2将冬眠保护剂应用到器官保存液中，能够使器官进入冬眠状态，延长保存时间，并且能够增强器官对缺血-缺氧的抗性，尤其能够提高内皮细胞对低温的耐受。虽然冬眠现象广泛存在于多种哺乳动物中，但确切分子机制并不清楚。目前关于冬眠的共识是低体温和低代谢率并且冬眠的动物器官保存完好。本发明采用低温来降低细胞代谢并利用低温下细胞膜的通透性增加来为细胞直接供给能量和和氧气，大大降低了冷缺氧损伤。另一方面最大限度地消除或者拮抗增加细胞活动的信号。如神经元对效应细胞发出的信号是通过释放神经递质如乙酰胆碱。保存液中拮抗乙酰胆碱的成分阻断了神经递质传递，在细胞信号传导层面抑制了细胞的活动。同时针对细胞膜上的钠、钾、钙离子通道，利用通道阻滞剂阻滞了其通道的功能，使低温不良环境的信号不能传送至细胞膜内。并且保存液中的钠钙通道阻滞剂使微小血管处于松弛状态。这些措施的目的是保持实体脏器内微血管通畅且通过低温以外的方法降低细胞活动。3本发明提供的器官保存液含有姜黄素，能够安全有效地降低器官因为非生理状态带来的炎症反应，延长保存时间。4提供的器官保存液中含有渗透压调节剂，能够有效调节渗透压，抑制细胞水肿和细胞间隙水肿，提高保存效果。5提供的器官保存液中含有免疫抑制剂，能够降低器官内免疫细胞的活性，减轻免疫反应，特别是对器官移植后的免疫排斥反应有抑制作用。综上所述，本发明提供的器官保存液廉价、高效，并适用于多器官保存。本发明所述保存液保存24小时后的大鼠心脏、肝脏和肾脏组织透视电镜观察结果显示：细胞内细胞器形态正常特别是线粒体形态正常，线粒体双层膜结构完整，且线粒体内微结构特别是嵴保存完好。光学显微镜显示细胞形态正常，细胞与细胞之间的结构紧密。肝脏经过本发明所述保存液体外常温保存24小时后各项功能保留完好，如胆汁分泌功能，白蛋白合成功能等。本发明采用动物冬眠的现象，结合细胞学、分子生物学，现代分子医学等学科综合应用，创造和发明了此保存液。附图说明图1示本发明保存液保存的大鼠肝脏HE染色切片组织检查肝脏结构图2示本发明保存液保存的大鼠肝脏HE染色切片组织检查胆管肝索结构图3示UW液保存大鼠肝脏HE染色切片组织检查肝脏细胞脱落放大40倍图4示UW液保存大鼠肝脏HE染色切片组织检查肝脏细胞脱落放大200倍图5示本发明保存液保肝24小时后在体外培养6小时后有肝脏细胞增生图6示UW保存液保肝24小时后在体外培养6小时未见肝脏细胞增生图7示本发明保存液保存的后新增殖的胆管上皮细胞图8示UW保存液保存的胆道，未见新增殖的胆管上皮细胞图9示新鲜肝脏组织电镜切片示正常的线粒体图10示UW液肝脏组织电镜切片示线粒体内部结构被破坏图11示本发明保存液保肝24小时的肝脏组织切片图12示UW保存液24小时静态保存心脏的内皮细胞脱落图13示UW保存液24小时静态保存心脏的内皮细胞脱落图14示本发明保存液24小时保存心脏的内皮细胞完整性图15示本发明保存液24小时保存心脏的内皮细胞完整性具体实施方式下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清明确的界定。下面所述具体实施方式中，所提及实验方法若无特殊说明均为通用实验方法；所使用试剂和材料若无特殊说明均为普通商业途径购买；本发明不限制于实施案例施用范围。实施例1一种器官保存液本实施例器官保存液的配制方法：无菌条件下，取部分去离子水，物质首先加入去离子水中，混匀后并使用盐酸和氢氧化钠调节pH至7.35-7.45，再最终定容至1000mL，并进行超饱和鼓氧，使液体中充满氧气超饱和。每1000mL保存液包含下表中各组分：实施例2大鼠肝移植供体保存效果检测HE染色雄性SD大鼠20只，分为两组，每组10只，无菌手术分离肝脏，分离过程用保存液冲洗，热缺血时间小于30min，第一组10只大鼠的离体肝脏应用UW液静态4℃冷保存，第二组应用实施例1所述器官保存液低温循环机械灌注保存，灌注压和灌注量均为生理量，灌注保存过程中器官保存液在超饱和鼓氧后立即从门静脉和肝动脉立即输入肝脏内。大鼠肝脏被本发明方法保存24h后，立即取样按照常规组织学方法进行HE染色切片组织检查。组织切片结果图1和2显示：使用本发明所述的器官保存液保存肝脏24h后的肝脏和胆管肝索结构清晰有条理，肝脏内中心静脉内壁完整，胆管内壁被完整地保存。而应用UW液保存的肝脏图3和4表明有显著差异。实施例3大鼠肝脏保存实验BrdU细胞增殖检测雄性SD大鼠20只，分为两组，每组10只，无菌手术分离肝脏，分离过程用保存液冲洗，热缺血时间小于5min，第一组10只大鼠的离体肝脏应用UW液静态4℃冷保存，第二组应用实施例1所述器官保存液低温循环机械灌注保存，灌注压和灌注量均为生理量，灌注保存过程中器官保存液在超饱和鼓氧后立即从门静脉和肝动脉立即输入肝脏内。在体外保存开始时各实验组保存液中加入BrdUMedChemExpressHY-15910，BrdU在保存液中的起始浓度是100nML，保存24h后，立即取样按照SuperSensitivePolymer-HRPdetectionsystem932-QDMAN-5X；Biogenex,SanRamon,CA,USA所述的方法进行BrdU特异性免疫荧光染色组织检查，使用的BrdU抗体为Biolegend公司的Purifiedanti-BrdUAntibody编号：339802。本发明的保存液培养肝脏24小时后在体外保存6个小时后出现肝脏细胞增殖图5。UW液保存的肝脏6个小时后则未见肝脏细胞增殖图6。两种方法在细胞增殖方面有明显的差异图7和8。肝脏胆管BrdU细胞增殖实验结果图7和8显示：使用本发明所述的器官保存液保存的肝脏胆管中，出现了明显的肝细胞增殖，而应用UW液保存的肝脏则没有这一现象，显示胆管上皮细胞在两种保存液的保护下存在较明显差异。上述结果表明，本发明所述器官保存液在器官体外保存应用中对大鼠肝脏微循环结构、细胞增殖和肝移植成功率的保护作用明显优于UW液。实施例4大鼠肝脏体外保存效果检测肝脏线粒体雄性SD大鼠20只，分为两组，每组10只，无菌手术分离肝脏，分离过程用保存液冲洗，热缺血时间小于30min，第一组10只大鼠的离体肝脏应用UW液静态4℃冷保存，第二组应用实施例1所述器官保存液低温循环机械灌注保存，灌注压和灌注量均为生理量，灌注保存过程中器官保存液在超饱和鼓氧后立即从肝门静脉和肝动脉立即输入肝内。保存24h后，立即取样按照电镜所需样品取样方法进行取样制片电镜检查。组织切片结果图9-图11显示：使用本发明所述的器官保存液保存后，大鼠肝脏细胞线粒体内膜和外膜融合现象明显下降，且线粒体内结构特别是嵴完整清晰，而应用UW液保存的大鼠肝脏肝脏细胞线粒体内膜和外膜融合，表明有显著差异。上述结果表明，本发明所述器官保存液在器官体外保存应用中对大鼠肝脏微循环结构、细胞增殖和肝移植成功率的保护作用明显优于UW液。实施例5大鼠心脏体外保存效果检测HE染色雄性SD大鼠20只，分为两组，每组10只，无菌手术分离心脏，分离过程用保存液冲洗，热缺血时间小于30min，第一组10只大鼠的离体心脏应用UW液静态4℃冷保存，第二组应用实施例1所述器官保存液低温循环机械灌注保存，灌注压和灌注量均为生理量，灌注保存过程中器官保存液在超饱和鼓氧后立即从主动脉立即输入心内。保存24h后，立即取样按照常规组织学方法进行HE染色切片组织检查。组织切片结果图12-图15显示：使用本发明所述的器官保存液能够保存心脏动静脉内皮细胞的完整性，而应用UW液保存的心脏，表明有显著差异。实施例6大鼠肝移植实验雄性SD大鼠40只，分为两组，每组20只10对，采用郑树森著作《大鼠肝移植图解》ISBN：9787117198769所述方法进行大鼠肝移植，其中肝脏分离过程用保存液冲洗，热缺血时间小于30min，分离后第一组10对大鼠中10供体大鼠的的离体肝脏应用UW液静态4℃冷24小时保存，第二组应用实施例1所述器官保存液低温循环机械灌注24小时保存，温度为4℃，灌注压和灌注量均为生理量，灌注保存过程中肝脏器官保存液在超饱和鼓氧后立即从门静脉和肝动脉立即输入肝脏内。大鼠存活情况如下表：以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

权利要求：1.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的方法，包括使所述细胞与保存液接触的步骤，其特征在于所述的保存液含有如下组分：a能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；b能量底物；c清除代谢产物的清除剂；d胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂；e氧气。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于用于器官的保存；优选地，其中所述的器官为肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道等。4.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的保存液，含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂和去离子水，其特征在于所述保存液还含有如下组分：a能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；b能量底物；c清除代谢产物的清除剂；d胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂；e氧气。5.根据权利要求4所述的保存液，其特征在于所述保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。6.根据权利要求1-3所述的方法或者根据权利要求4-5所述的保存液，其中：所述的基本盐类选自氯化钠、氯化钾或硫酸镁中的一种或者两种以上；所述pH缓冲剂选自HEPES盐、磷酸盐、碳酸盐、磷酸氢盐、碳酸氢盐、组氨酸中的一种或者两种以上；所述的冬眠保护剂选自抑制细胞代谢类药物、细胞信息通路的抑制剂、神经递质拮抗剂，钠、钾或钙离子通道阻滞剂中的一种或者两种以上；优选地，所述的冬眠保护剂选自水合氯醛、利多卡因、阿托品、普鲁卡因、硝本地平、苯妥英钠、盐酸胺碘酮、东莨菪碱、山莨菪碱中的一种或者两种；所述能量底物选自三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、磷酸腺苷、乙酰辅酶A、胰岛素、葡萄糖中的一种或者两种以上；所述清除剂是选自清除引起细胞死亡的代谢产物的物质中一种或两种以上；优选地，所述清除剂选自维生素C、鱼藤酮、奥苷嘌醇、N-硝基-L-精氨酸甲酯、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、异抗坏血酸钠、植酸、茶多酚中的一种或者两种以上；所述的胶体渗透压维持剂选自羟乙基淀粉、透明质酸盐、透明质酸、甘露醇中的一种或者两种以上；所述的胶体渗透压调节剂选自棉子糖、右旋糖酐、白蛋白、葡聚糖中的一种或者两种以上。所述的抗生素选自氟苯尼考、青霉素、链霉素、庆大霉素、氯霉素、头孢菌素、土霉素、红霉素、粘菌素、灰黄霉素中的一种或者两种以上；所述的抗炎药物选自姜黄素、芬必得、莫比可、阿司匹林、对乙酰氨基酚、双氯芬酸、吲哚美辛、布洛芬、芬布芬中的一种或者两种以上；所述的免疫抑制剂选自环孢素A、他克莫司、环磷酰胺、雷帕霉素、硫锉嘌呤、甲氨蝶呤、糖皮质激素例如地塞米松中的一种或者两种以上。7.根据权利要求6所述的保存液，其含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂、冬眠保护剂、能量底物、清除代谢产物的清除剂、胶体渗透压维持剂和或胶体渗透压调节剂、抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂、氧气和去离子水。8.根据权利要求7所述的保存液，其中每1000mL的液体含有：9.根据权利要求4-8所述的保存液，其特征在于所述保存液的pH值为7.4±0.1，盐度为9.0，渗透压为290-380mOsmkgH2O，其中胶体渗透压为1.5-30.0mOsmkgH2O。10.权利要求4-9任一项所述保存液作为维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和或功能的保存液的应用；优选地，所述保存液作为器官保存液的应用；更优选地，所述的器官选自肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道。

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