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检测目标核酸分子的方法 

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申请/专利权人:10X基因组学有限公司

摘要:本申请提供了用于检测核酸分子的方法,包括使用对应于所述核酸分子的信号代码序列和多个标记的检测探针,所述检测探针产生构成该信号代码序列的信号。特别地,本发明提供了连续条形编码和解码方案,其采用杂交测序SBH策略以测序和解码核苷酸条形码序列,并区分该核苷酸条形码序列与其它核苷酸条形码序列。在该方法的扩展中,本申请还提供了用于提供具有基于可检测“颜色”或类似信号的代码的目标核酸的新编码方案。

主权项:1.一种分析样品的方法,包括:a在所述样品中制造滚环扩增RCA产物,所述RCA产物包括核苷酸条形码序列的多拷贝,其中所述核苷酸条形码序列与目标分析物相关并且信号代码序列被分配给所述条形码序列,并且其中所属样品为细胞或组织样品;b使所述样品与第一检测探针和第一报道分子探针接触以生成第一复合物,所述第一复合物包含与所述RCA产物杂交的所述第一检测探针和与所述第一检测探针杂交的所述第一报道分子探针,其中所述第一检测探针包含i与所述条形码序列互补的识别序列,和ii第一突出端序列,以及,其中所述第一报道分子探针包含i与第一突出端序列互补的序列,和ii第一光学可检测部分;c对所述样品进行成像以检测来自所述第一光学可检测部分的第一信号,其中所述第一信号对应于信号代码序列中的第一信号代码;d使所述样品与第二检测探针和第二报道分子探针接触以生成第二复合物,所述第二复合物包含与所述RCA产物杂交的所述第二检测探针和与所述第二检测探针杂交的所述第二报道分子探针,其中所述第二检测探针包含i与所述条形码序列互补的识别序列,和ii第二突出端序列,以及其中所述第二报道分子探针包含i与第二突出端序列互补的序列,和ii第二光学可检测部分;以及e对所述样品进行成像以检测来自第二光学可检测部分的第二信号,其中所述第二信号对应于所述信号代码序列中的第二信号代码,其中在c和d中间,所述方法包括从所述RCA产物上移除所述第一检测探针,并且其中所述信号代码序列至少包括已被确定的所述第一信号代码和所述第二信号代码在样品中的位置,从而解码所述条形码序列并识别所述目标分析物在样品中的所述位置。

全文数据:

权利要求:

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