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一种katG基因突变结核杆菌的RPA-CRISPR的一锅式检测试剂盒及方法 

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申请/专利权人:南京医科大学康达学院

摘要:本发明提供了一种检测结核杆菌katG基因突变型的检测试剂盒。该试剂盒的采用CRISPRCas13a技术,根据katG基因以单碱基突变位点,设计多条特异性错配的crRNA,使得一次反应同时检测多个位点,同时检测出katG基因是否突变。同时采用“一锅式”设计,将裂解后的样本加入体系内后无需再开盖,在一管内进行RPA反应和CRISPR反应,快捷方便,避免了在反应过程中造成的交叉污染。该反应条件简单,在37℃下即可反应,在蓝色LED灯下,可凭肉眼观察到FAM荧光信号,不依赖于大型仪器和专业人员,适用于基层快速筛查。

主权项:1.一种用于KatG突变检测的检测试剂盒,其特征在于:包括反应体系预混液;所述反应体系预混液包括500nM用于RPA扩增的正向引物RPA-F和反向引物RPA-R,500nMssRNA报告分子、1xT7RNA聚合酶,1xLwaCas13a,各200nM多种crRNA,1xrCutsmart缓冲液、1mMNTPmix、1UμL重组RNA酶抑制剂、1×RPA补液缓冲液、1×RPABasicE-mix、14mMMgOAc。

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权利要求:

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