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申请/专利权人：贵州大学;贵州省林业科学研究院

摘要：本发明公开了一种小叶兜兰种子直播与菌丝体共生培育的方法，该方法包含：1、真菌菌丝块的制作；2、培养基质的制备；3、小叶兜兰种子直播：将健壮成熟的小叶兜兰种子荚切开后，种子均匀撒播于培养基质的菌根真菌‑PDA菌丝体块表面，然后用无菌水喷浇至菌丝体和种子湿润为止；合盖上培养皿，放入温度为24℃，湿度为80％，光照强度为1200lux的人工气候箱，光暗比为18：6；4、小叶兜兰种子共生培育：形成菌根化种苗；5、菌根化种苗栽培管理。本方法首次报道了关于小叶兜兰种子直播于土壤基质内且成功萌发成苗的技术方法，能够将小叶兜兰种子与菌丝体共生培养在土壤基质中，缩短了育苗周期，且种苗长势优良。

主权项：1.一种小叶兜兰种子直播与菌丝体共生培育的方法，其特征在于，该方法包含：1、真菌菌丝块的制作将活化培养的保藏编号为CCTCCNO：M20211513的菌株Epulorhizasp.FQXY019接种至PDA平板培养基上，培养至菌丝体长满培养皿后，获得PDA-菌根真菌培养基；用解剖刀将菌丝体沿培养基底部切取下来，菌丝体附带1～2mm的PDA培养基，获得菌根真菌-PDA菌丝体块；2、培养基质的制备将一层以上的无菌滤纸垫入培养皿内部，倒入无菌自来水，直至滤纸完全浸透为止，将无菌的蛭石或泥炭土均匀铺于所述无菌滤纸上，将所述菌根真菌-PDA菌丝体块置于所述蛭石或泥炭土的表面，获得培养基质；3、小叶兜兰种子直播将健壮成熟的小叶兜兰种子荚切开后，将种子均匀撒播于所述培养基质的菌根真菌-PDA菌丝体块表面，控制所述菌根真菌-PDA菌丝体块上种子密度为30个cm2，然后用无菌水喷浇至所述培养基质饱和，种子湿润为止；合盖上培养皿，放入温度为24℃，湿度为80％，光照强度为1200lux的人工气候箱，光暗比为18：6；4、小叶兜兰种子共生培育每隔若干天喷洒一次无菌水，共生培养，种子在蛭石上成功萌发形成原球茎，继续共生培养，原球茎分化，长出第一片叶，形成幼苗，再继续共生培养，纤毛状假根出现，幼根长出根毛，形成菌根化种苗；5、菌根化种苗栽培管理选择主根数2条以上且叶片数2～3片的菌根化种苗，将所述菌根化种苗取出，浅种于栽培基质中，露出根茎以上叶片，浇透定根水；其中，所述栽培基质采用质量比为60：20：20的蛭石、植金石和泥炭土配制的混合基质，该混合基质经过消毒处理；对移栽的菌根化种苗进行大棚栽培管理，栽培场地空气流通，遮光度控制在70～80％，生长温度为15～32℃，空气湿度为75～80％，浇水保持栽培基质含水量为35～50％，施加奥绿缓释肥。

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