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申请/专利权人：之江实验室
摘要：本发明公开了一种用于髓鞘结构研究的神经组织透射电镜样品处理制备方法，该方法包括：首先对神经组织样品进行固定、清洗；再进行二重固定、二重清洗；然后进行脱盐、脱水；其次对样品进行渗透包埋；再进行梯度聚合；然后修块切片；最后染色、观察。本发明解决了在对神经组织进行电镜制样的过程中，柔软神经组织易受拉扯挤压、脱水效率导致的结构收缩以及髓鞘层次不明或者伪影问题、组织固定后机械性物理损伤问题，使最终得到的组织硬度适中，结构完整，髓鞘超微结构层次清晰紧实，无明显挤压拉扯所致的松散变性现象。
主权项：1.一种用于髓鞘结构研究的神经组织透射电镜样品处理制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、固定、清洗：将神经组织样品放入体积浓度为2.5%的戊二醛固定液中，在20℃~25℃中避光固定2h，再放入4℃中固定过夜，再用浓度为0.01molL的磷酸盐缓冲液清洗3次，每次15min；S2、二重固定、二重清洗：将步骤S1清洗后的神经组织样品完全浸没在体积浓度为1%的锇酸溶液中，4℃避光静置90~120min，再用浓度为0.01molL的磷酸盐缓冲液清洗3次，每次15min；S3、脱盐、脱水：将步骤S2清洗后的神经组织样品使用擦镜纸包裹，依次用磷酸盐缓冲液的梯度稀释液浸泡包裹样品进行脱盐，再依次使用梯度浓度的乙醇、浓度为70%的乙醇铀、无水乙醇与丙酮混合液、浓度为100%的丙酮浸泡样品进行脱水；S4、渗透包埋：将步骤S3脱水后的神经组织样品依次用不同比例的丙酮与树脂混合液各浸泡渗透90min，最后换新管并浸入纯树脂中，20℃~25℃过夜；S5、梯度聚合：向包埋板孔中加入新鲜纯树脂，取出神经组织样品放入盛有树脂的包埋板孔中，整姿去泡，放入恒温箱中进行梯度聚合，24h后取出树脂包埋块，完成样品处理；S6、修块切片：切割包埋块以使其切割面仅暴露目的样品，用超薄切片机和砖石刀进行超薄切片，并烤干；其中，超薄切片的厚度为50~70nm；S7、染色、观察：对超薄切片进行染色处理，放置于铜网中，最后用透射电镜进行观察拍照，记录髓鞘超微结构。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 之江实验室 用于髓鞘结构研究的神经组织透射电镜样品处理制备方法
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