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申请/专利权人：昆明理工大学

摘要：本发明公开了一种阳离子纳米酶结合适配体检测细菌内毒素的方法，通过一步水热法或微波法合成壳聚糖及血红素基铜、铁掺杂阳离子纳米酶CS@Cu,FeHeme，该纳米酶与细菌内毒素的适配体形成复合物CS@Cu,FeHeme@Apt具有类过氧化物酶及漆酶活性，一方面类过氧化物酶及漆酶催化H2O2、2,4‑二氯苯酚2,4‑DP和4‑氨基安替比林4‑AP，得到红色产物，另一方面纳米酶表面带正电荷及适配体与带负电荷的细菌内毒素有效结合，细菌内毒素的加入降低了纳米酶的活性位点，CS@Cu,FeHeme@Apt氧化底物时，加入细菌内毒素，抑制了氧化反应进行，细菌内毒素浓度与氧化产物吸光度降低呈线性关系，本发明检出限为0.000213EUmL，检测时间仅需要30min，本方法应用于药品及生物制品中细菌内毒素的检测分析，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

主权项：1.一种阳离子纳米酶结合适配体检测细菌内毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：1将0.50-1.0g壳聚糖、0.30-0.50g柠檬酸、0.50-1.0gFeCl3·6H2O、0.50-0.80gCuCl2·2H2O加入到1％的乙酸溶液30-50mL中，再加入0.20-0.40g血红素，超声处理20-30min后，将该混合溶液转移至聚四氟乙烯高压反应釜中，在微波170-190℃下反应1-2h；或将该混合溶液转移至高压反应釜中，置于马弗炉中在180-200℃反应8-10h，反应完成后自然冷却至室温，用0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，再经高速离心，取上清液真空干燥，得到壳聚糖及血红素基铜、铁掺杂阳离子纳米酶CS@Cu,FeHeme；2将细菌内毒素适配体溶液与CS@Cu,FeHeme溶液混合，在37℃下孵育25-30min，制得纳米酶与适配体复合物CS@Cu,FeHeme@Apt；3分别在不同浓度细菌内毒素溶液中加入CS@Cu,FeHeme@Apt溶液、Na+和Mg2+混合溶液，然后加入2,4-二氯苯酚、4-氨基安替比林、H2O2、pH6.8MES缓冲溶液，混匀，静置5-10min，在510nm波长处测定吸光度，确定细菌内毒素浓度与吸光度值的线性关系，绘制标准曲线，得到回归方程；4将含细菌内毒素的待测样品液与CS@Cu,FeHeme@Apt溶液混合，加入Na+和Mg2+的混合溶液、2,4-二氯苯酚、4-氨基安替比林、H2O2及pH6.8MES缓冲溶液，混匀，静置5-10min，在510nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤3回归方程中，获得样品中细菌内毒素含量。

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